本文選題：擬南芥 + AtLCR��； 參考：《分子植物育種》2017年06期

【摘要】：擬南芥AtLCR67基因?qū)儆诘头肿恿扛缓腚装彼?low-molecular-weight cysteine-rich,LCR)基因家族。在正常生長(zhǎng)條件下,該基因在發(fā)育的種子中特異表達(dá)。為了研究該基因在發(fā)育或代謝過(guò)程中的可能作用,在沒(méi)有合適T-DNA插入突變?nèi)狈Φ那闆r下,我們利用CRISPR-Cas9定向敲除技術(shù)來(lái)創(chuàng)制該基因沉默的擬南芥突變體材料。通過(guò)構(gòu)建AtLCR67基因的CRISPR-Cas9敲除質(zhì)粒,借助農(nóng)桿菌介導(dǎo)的浸花法轉(zhuǎn)化野生型擬南芥Col-0,最終獲得12株T0代轉(zhuǎn)基因植株。對(duì)T0轉(zhuǎn)基因植株的AtLCR67基因進(jìn)行測(cè)序分析發(fā)現(xiàn),在設(shè)計(jì)的靶位點(diǎn)處存在短片段缺失12個(gè)堿基和增加一個(gè)T堿基兩種突變類(lèi)型,進(jìn)一步做RT-PCR檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn)突變體中AtLCR67基因完全不表達(dá),說(shuō)明成功獲得擬南芥lcr67突變體。突變體材料的獲得為進(jìn)一步研究AtLCR67基因在發(fā)育或代謝方面的的功能奠定了良好基礎(chǔ)。
[Abstract]:Arabidopsis thaliana AtLCR67 gene belongs to low-molecular-weight cysteine-rich LCR gene family. Under normal growth conditions, the gene was specifically expressed in developing seeds. In order to study the possible role of the gene in the development or metabolism of Arabidopsis thaliana, in the absence of suitable T-DNA insertion mutation, CRISPR-Cas9 targeted knockout technique was used to create the silenced Arabidopsis mutants. The CRISPR-Cas9 knockout plasmid of AtLCR67 gene was constructed and transformed into wild-type Arabidopsis thaliana Col-0 by Agrobacterium tumefaciens. Finally, 12 transgenic plants of T0 generation were obtained. Sequencing analysis of AtLCR67 gene in T0 transgenic plants showed that there were two types of mutations at the designed target site: short fragment deletion of 12 bases and addition of one T base. Further RT-PCR analysis revealed that AtLCR67 gene was not expressed at all in the mutant, which indicated that the Arabidopsis lcr67 mutant was successfully obtained. The acquisition of mutants laid a good foundation for further study on the developmental and metabolic functions of AtLCR67 gene.
【作者單位】： 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然基金面上項(xiàng)目(31571707) 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目子課題(2016YFD0100202-8)共同資助
【分類(lèi)號(hào)】：Q943.2

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