發(fā)布時(shí)間：2018-06-24 04:07

  本文選題：新疆褐牛 + CD�。� 參考：《動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展》2017年08期

【摘要】：旨在克隆并表達(dá)新疆褐牛CD46基因,制備其多克隆抗體,為進(jìn)一步研究牛CD46分子生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。采用RT-PCR方法從新疆褐牛脾臟中擴(kuò)增CD46基因全長(zhǎng),進(jìn)行測(cè)序,并對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析,將CD46部分序列亞克隆于pET-28a(+)和pVAX1載體中。將陽(yáng)性重組質(zhì)粒pET-28a-△CD46轉(zhuǎn)化于E.coli Rosetta-gamiB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,誘導(dǎo)表達(dá)截短CD46蛋白。用切膠純化的His-△CD46融合蛋白免疫新西蘭大白兔,制備多克隆抗體;采用ELISA測(cè)定多克隆抗體的效價(jià);取無(wú)內(nèi)毒素重組質(zhì)粒pVAX1-△CD46轉(zhuǎn)入BHK-21(倉(cāng)鼠腎細(xì)胞)細(xì)胞,表達(dá)產(chǎn)物以制備的多克隆抗體為一抗,采用Western blot法檢測(cè)該多克隆抗體的特異性。CD46基因的測(cè)序結(jié)果表明,部分基因蛋白表達(dá)、純化條帶大小與預(yù)期一致;制備的抗牛CD46多克隆抗體效價(jià)高于1∶128 000,并具有良好的特異性。
[Abstract]:The aim of this study was to clone and express the CD46 gene of Xinjiang Brown cattle and to prepare its polyclonal antibody, which laid a foundation for further study on the molecular biological function of bovine CD46. The full-length CD46 gene was amplified from the spleen of Xinjiang brown cattle by RT-PCR and sequenced. The results were analyzed by bioinformatics. The CD46 partial sequence was subcloned into pET-28a () and pVAX1 vectors. The positive recombinant plasmid pET-28a- CD46 was transformed into E. coli Rosetta-gamiB (DE3) competent cells, and the truncated CD46 protein was induced to express in E. coli Rosetta-gamiB (DE3) cells. New Zealand white rabbits were immunized with His-CD46 fusion protein purified by gelatin, polyclonal antibody was prepared, the titer of polyclonal antibody was determined by Elisa, and recombinant plasmid pVAX1-CD46 without endotoxin was transferred into BHK-21 (hamster kidney cell) cells. The specific. CD46 gene of the polyclonal antibody was detected by Western blot assay. The results showed that some of the protein expressed and purified were the same size as expected. The titer of anti-bovine CD46 polyclonal antibody was higher than 1: 128 000 and had good specificity.
【作者單位】： 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;
【基金】：新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013211A030)
【分類號(hào)】：S823

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本文編號(hào)：2059941