本文選題：羽衣甘藍(lán) + 粉色葉基因Pi��； 參考：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：羽衣甘藍(lán)(Brassica oleracea var. acephala DC)是一種葉色十分豐富多變的二年生草花。由于其酷似牡丹的華麗外形以及喜歡冷涼氣候的習(xí)性,在我國北方地區(qū)的綠化中脫穎而出。當(dāng)溫度低于15℃,中心葉由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)榻k麗的顏色,具有較高觀賞品質(zhì)。本研究以粉色葉和白色葉羽衣甘藍(lán)為親本,利用初步定位側(cè)翼標(biāo)記篩選1359株超大F2群體,共獲得68株重組株,對羽衣甘藍(lán)粉色葉基因Pi進行了重新錨定,構(gòu)建了遺傳連鎖圖譜。利用蕓薹屬C基因組及擬南芥基因組數(shù)據(jù)庫,分別獲得了花青素生物合成調(diào)節(jié)基因、側(cè)翼標(biāo)記所在的Scaffold及其DNA序列,設(shè)計引物,在Pi錨定區(qū)域開發(fā)了新的DNA分子標(biāo)記。主要研究結(jié)果如下：1.利用已獲得的粉色葉基因Pi初步定位側(cè)翼標(biāo)記Ni2C12和Boac04,分別對超大F2群體進行逐一篩選,成功構(gòu)建了羽衣甘藍(lán)粉色葉基因重組群體,該重組群體共包含68株重組株。2.由于對Pi基因的初步定位利用184株F2群體,定位結(jié)果不夠精確,本研究利用已構(gòu)建的1359株超大F2群體,結(jié)合初定位側(cè)翼標(biāo)記對粉色葉基因Pi進行重新錨定,結(jié)果將初定位區(qū)域矯正在C03染色體的0-11 Mb區(qū)間內(nèi),且Pi基因位于C03染色體頂端,與標(biāo)記Ni2C12的遺傳距離為4.5 cM,與標(biāo)記Boac04的遺傳距離為8.5 cM,標(biāo)記Ni2C12為距離粉色葉基因最近的側(cè)翼標(biāo)記。3.根據(jù)蕓薹屬C基因組及擬南芥基因組提供的基因注釋信息,在甘藍(lán)C03染色體0-16 Mb的區(qū)域內(nèi),成功挖掘76個花青素生物合成調(diào)節(jié)基因并設(shè)計合成了80對引物,其中74對引物可擴增出產(chǎn)物,擴增效率為91%。在親本間具有多態(tài)性的標(biāo)記共4個,且均為共顯性標(biāo)記。進一步篩選重組群體發(fā)現(xiàn),4個共顯性標(biāo)記比初定位側(cè)翼標(biāo)記Boac04的重組株分別減少了16、10、16、13株,獲得了與Pi基因更緊密連鎖的分子標(biāo)記。4.經(jīng)比對發(fā)現(xiàn)Ni2C12位于甘藍(lán)基因組Scaffold000123上,具體物理位置為555793-556023 bp。為了更為精確的搜索Ni2C12附近的SSR位點,運用SSRHunter對Scaffold000123的0-1 Mb區(qū)間進行SSR位點搜索,共搜索得到824個SSR位點,其中三核苷酸為重復(fù)基元的SSR數(shù)量為811個,占總SSR位點的98.42%。經(jīng)同源性比對后篩選得到39條SSR序列,并設(shè)計SSR引物。35對SSR引物可以擴增出理想產(chǎn)物,且有14對在親本及基因池間具有多態(tài)性,可用于羽衣甘藍(lán)粉色葉基因精細(xì)定位的研究當(dāng)中。
[Abstract]:Kale (Brassica oleracea var. acephala DC) is a kind of biennial flowers with rich leaf color. Because of its gorgeous appearance like peony and the habit of like cool climate, it stands out in the greening of northern China. When the temperature is lower than 15 鈩，

本文編號：2054014