本文選題：轉(zhuǎn)基因水稻 + 拷貝數(shù)　； 參考：《農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報》2017年12期

【摘要】：轉(zhuǎn)基因植物中外源基因的拷貝數(shù)影響遺傳穩(wěn)定性和基因表達水平,因此鑒定和篩選單拷貝純合的植株對于子代材料的功能分析是十分必須的。為了快速、準確的對含有潮霉素抗性基因-潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶II(hygromycin phosphotransferase II,hpt II)的轉(zhuǎn)基因水稻材料進行拷貝數(shù)鑒定,本研究選用了穩(wěn)定的組成型基因水稻轉(zhuǎn)錄剪切因子U2af(Oryza sativa splicing factor U2af,Os SFu2a)作為內(nèi)參基因,構(gòu)建基于Taqman的多重熒光定量PCR(Multiplex q RT-PCR)的拷貝數(shù)鑒定體系。通過不同引物組合進行擴增效率比較,確定了hpt II-1和Os SFu2a-2為最佳引物組合。利用該體系對10個轉(zhuǎn)基因克隆進行了拷貝數(shù)鑒定,結(jié)果其中7個克隆為單拷貝植株,3個克隆為雙拷貝植株。隨后,通過Southern blot和轉(zhuǎn)基因子代分離比統(tǒng)計,驗證了此方法的可靠性;并通過與傳統(tǒng)的單重熒光定量PCR(Singlex q RT-PCR)法進行比較,結(jié)果表明多重熒光定量PCR法大大提高了檢測的準確性和穩(wěn)定性。因此,該方法能夠幫助科研人員快速,準確,高通量的鑒定水稻外源基因拷貝數(shù)與純合體植株。
[Abstract]:The number of copies of foreign genes in transgenic plants affects genetic stability and gene expression level, so it is necessary to identify and screen single-copy homozygous plants for functional analysis of progenies. In order to quickly and accurately identify the copy number of transgenic rice materials containing hygromycin phosphotransferase IIHPT, a hygromycin phosphotransferase gene, In this study, a stable transcription shear factor U2afa Oryza sativa splicing factor U2aftOs SFu2a was used as the internal reference gene to construct the copy number identification system of multiplex PCRX multiplex Q RT-PCR based on Taqman. By comparing the amplification efficiency of different primer combinations, hpt II-1 and Os SFu2a-2 were determined as the best primer combinations. The system was used to identify the copy number of 10 transgenic clones. The results showed that 7 clones were single copy plants and 3 clones were double copy plants. Then, the reliability of the method was verified by Southern blot and the statistics of segregation ratio of transgenic progeny, and compared with the traditional single fluorescence quantitative PCRX Q RT-PCR. The results showed that the detection accuracy and stability were greatly improved by multiplex fluorescence quantitative PCR. Therefore, this method can help researchers quickly, accurately, high-throughput identification of foreign gene copy number and homozygous plants.
【作者單位】： 福建省農(nóng)業(yè)科學院水稻研究所;農(nóng)業(yè)部華南雜交水稻種質(zhì)創(chuàng)新與分子育種重點實驗室/福州(國家)水稻改良分中心/福建省作物分子育種工程實驗室/福建省水稻分子育種重點實驗室/福建省物種質(zhì)創(chuàng)新與分子育種省部共建國家重點實驗室培育基地/雜交水稻國家重點實驗室華南研究基地;水稻國家工程實驗室;
【基金】：國家轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物新品種培育重大專項(No.2016ZX08001-006和No.2016ZX08001-004) 福建省財政專項-福建省農(nóng)業(yè)科學院創(chuàng)新團隊PI項目(No.2016PI-15)
【分類號】：S511

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