本文選題：細(xì)粒棘球絳蟲 + EgM蛋白��； 參考：《動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展》2017年10期

【摘要】：對(duì)細(xì)粒棘球絳蟲EgM123基因進(jìn)行分子克隆和生物信息學(xué)分析,同時(shí)對(duì)EgM家族基因在蟲體不同發(fā)育階段的mRNA轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行初步研究。采集綿羊肝臟包囊中原頭蚴,提取總RNA,通過RT-PCR獲取EgM123純化的PCR產(chǎn)物,克隆到pGEM-T載體并測(cè)序,對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能的預(yù)測(cè)分析。以Actin基因?yàn)閮?nèi)參基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR技術(shù),對(duì)不同發(fā)育階段,即其原頭蚴和成蟲的EgM4、EgM9、EgM123的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,EgM123基因ORF為594bp,編碼197個(gè)氨基酸,蛋白分子質(zhì)量為21.959ku,等電點(diǎn)為7.94。EgM123蛋白無信號(hào)肽、跨膜螺旋區(qū)和卷曲螺旋結(jié)構(gòu),是一種親水性的可溶性蛋白質(zhì),存在23個(gè)磷酸化位點(diǎn)。根據(jù)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)顯示,EgM123蛋白主要位于細(xì)胞核內(nèi)。二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)含α-螺旋9.64%、β-折疊22.84%、無規(guī)則卷曲62.94%。EgM123氨基酸序列中有6個(gè)潛在的抗原表位。RT-qPCR結(jié)果顯示,成蟲階段EgM家族基因表達(dá)量極顯著高于原頭蚴階段。在發(fā)育的同一階段,EgM123基因極顯著高于EgM4、EgM9基因的表達(dá)量。通過EgM家族基因在蟲體不同發(fā)育階段的mRNA轉(zhuǎn)錄水平,EgM123基因在蟲體成蟲階段高表達(dá),以期為篩選細(xì)粒棘球絳蟲終末宿主疫苗候選基因提供理論依據(jù)。
[Abstract]:The EgM123 gene of Echinococcus granulosus was cloned by molecular cloning and bioinformatics analysis, and the mRNA transcription level of EgM family genes at different stages of development of Echinococcus granulosus was studied. The purified PCR product of EgM123 was obtained by RT-PCR and cloned into pGEM-T vector and sequenced. The structure and function of the sequencing results were predicted and analyzed. Using Actin gene as internal reference gene, the expression of EgM4, EgM9, EgM123 was detected by SYBR Green real-time RT-PCR in different developmental stages, I. e., egg M4, EgM9, EgM123. The results showed that the ORF of EgM123 gene was 594bp, encoding 197 amino acids, protein molecular weight was 21.959ku.Isoelectric point was 7.94.EgM123 protein without signal peptide, transmembrane helical region and curly helical structure, it was a hydrophilic soluble protein with 23 phosphorylation sites. According to the subcellular localization prediction, the egg M123 protein was mainly located in the nucleus. The prediction of secondary structure includes 偽 -helix 9.64, 尾 -folding 22.84b and irregular curl 62.94. EgM123 amino acid sequence. The results of RT-qPCR showed that the expression of EgM family genes in adult stage was significantly higher than that in proto cercariae stage. At the same stage of development, the expression of EgM123 gene was significantly higher than that of EgM4 EgM9 gene. In order to provide theoretical basis for screening candidate genes of Echinococcus granulosus final host vaccine, EgM family genes were overexpressed at different stages of mRNA transcription of Echinococcus granulosus at different stages of development of Echinococcus granulosus (Echinococcus granulosus).
【作者單位】： 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;省部共建綿羊遺傳改良和健康養(yǎng)殖國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31360623) 研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目(XJAUGRI2015017)
【分類號(hào)】：S852.734

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3 高s，

本文編號(hào)：2041335