本文選題：遺傳標記 + IGFBP��； 參考：《揚州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：鵝肥肝既是重要的水禽產(chǎn)品,也是獨特的非酒精性脂肪肝研究模型。發(fā)現(xiàn)與鵝肥肝形成相關(guān)的關(guān)鍵候選基因,揭示它們與鵝肥肝形成的關(guān)系,不僅可以促進鵝肥肝形成機制的闡明,而且有助于肝用鵝的分子育種。當一個基因的表達量或其核酸多態(tài)性標記(如SNP)與肥肝鵝的生產(chǎn)性能存在關(guān)聯(lián)時,該基因或可用作輔助選擇標記來提高肥肝鵝的育種效率,克服目前肥肝鵝育種存在的問題。本研究對IGFBP家族基因和一個長非編碼RNA基因(LOC106047490)的表達量進行測定,并對這些基因所含SNP位點與肥肝鵝的生產(chǎn)性能進行關(guān)聯(lián)分析。具體的研究方法和結(jié)果如下:1.利用熒光定量PCR檢測填飼19天朗德鵝和對照鵝肝臟中IGFBP家族基因的表達。數(shù)據(jù)表明,相對于正常肝臟,鵝肥肝中IGFBP1、IGFBP2和IGFBP5的表達受到明顯抑制。該結(jié)果提示這三個基因與鵝肥肝的形成密切相關(guān),它們的表達量或可用于肥肝鵝生產(chǎn)性能的預(yù)測。2.對IGFBP1、IGFBP2和IGFBP5基因及上游DNA區(qū)域(起始密碼子上游2kb)進行引物設(shè)計,檢測這些基因SNP位點,并分析SNP位點與填飼鵝生產(chǎn)性能指標(如肝重、腹脂重和胴體重等)的關(guān)聯(lián)。對于SNP位點的篩查,首先利用10只朗德鵝和10只揚州鵝查找品種間的SNP位點,然后擴大樣本量檢測朗德鵝特有的SNP位點。結(jié)果顯示:①對于IGFBP1基因,揚州鵝品種內(nèi)有7個SNP,朗德鵝品種內(nèi)未發(fā)現(xiàn)SNP,而朗德鵝和揚州鵝品種間共有12個SNP;②對于IGFBP2基因,揚州鵝品種內(nèi)有13個SNP,朗德鵝品種內(nèi)有1個SNP,而兩個品種間共存在49個SNP。統(tǒng)計分析表明朗德鵝品種內(nèi)的SNP位點與腹脂重呈顯著相關(guān)(p0.01);③對于IGFBP5,揚州鵝品種內(nèi)有10個SNP,朗德鵝品種內(nèi)特有3個SNP,而朗德鵝和揚州鵝品種間共存在19個SNP。統(tǒng)計分析表明朗德鵝品種內(nèi)的兩個SNP位點與肥肝重呈顯著相關(guān)(p0.01)。這些發(fā)現(xiàn)從關(guān)聯(lián)分析的角度進一步證實了這些基因作為肝用鵝育種輔助選擇標記的應(yīng)用價值。3.NCBI數(shù)據(jù)庫中IGFBP2基因上游距離起始密碼子1602bp處存在部分序列未知,本研究通過基因特異性PCR擴增獲得了這段367bp長的序列。4.利用熒光定量PCR檢測1ncRNA基因(LOC106047490)在鵝不同填飼期(7天、14天及19天)肝臟、腹脂和胸肌中的表達量。結(jié)果表明,填飼可以抑制該基因在三個組織中的表達,且隨著填飼時間的延長,該基因在肝臟和胸肌中的表達量下調(diào)更加明顯,這可能與組織中脂肪的沉積量有關(guān)。該發(fā)現(xiàn)提示該長非編碼RNA基因的表達量或可預(yù)測肥肝鵝組織中的脂肪沉積量。5.為進一步明確該基因與鵝肥肝形成的關(guān)系,本研究利用熒光定量PCR檢測了 1ncRNA基因(LOC106047490)在不同脂肪肝形成相關(guān)因子(葡萄糖、胰島素、棕櫚酸、油酸和亞油酸)處理下鵝原代肝細胞中的表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),除棕櫚酸外,其他因子均能誘導(dǎo)該基因的表達,且這種誘導(dǎo)具有一定的劑量效應(yīng)。這種誘導(dǎo)與鵝肥肝中的表達抑制不一致,提示鵝肥肝形成中還存在著其他更重要的因子調(diào)控該基因的表達。6.為進一步探討該基因作為輔助選擇標記的應(yīng)用價值,本研究分析了該基因表達的組織特異性,利用熒光定量PCR對該基因在23日胚齡和89日齡鵝的不同組織中表達量進行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在鵝胚胎期LOC106047490基因在肝臟和腿肌中表達量較低,而在心、胸肌、腸和肌胃中的表達量較高;而在89日齡鵝,該基因在腹脂中的表達量最高。此外,通過不同時期同類組織中該基因表達量的比較,可以發(fā)現(xiàn)該基因的表達模式受鵝生長時間的影響。這些結(jié)果為該基因用于鵝育種中的輔助選擇提供了參考信息。7.對朗德鵝和揚州鵝LOC106047490基因的外顯子區(qū)進行SNP分析,在揚州鵝品種內(nèi)發(fā)現(xiàn)12個SNP位點,而在朗德鵝品種內(nèi)未發(fā)現(xiàn)SNP位點。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)IGFBP家族基因和長非編碼RNA基因(LOC106047490)均與鵝肥肝的形成密切關(guān)聯(lián),是肥肝鵝輔助選擇標記的重要候選基因。進一步開發(fā)利用這些基因,將有助于肥肝鵝育種中現(xiàn)有問題的解決。
[Abstract]:The expression of IGFBP1 , IGFBP2 , IGFBP5 and IGFBP5 in goose liver was studied . The results showed that the expression of the gene was higher in the liver and the leg muscle than the palmitic acid . The results showed that the expression of the gene was higher in the liver and the leg muscle than the palmitic acid .
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S835

【參考文獻】

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本文編號：2038513