發(fā)布時(shí)間：2018-06-17 04:25

  本文選題：N基因 + TMV�。� 參考：《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院》2016年碩士論文

【摘要】：由煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)侵染煙草所引起的煙草花葉病毒病是一種危害嚴(yán)重的煙草病害,在我國乃至全世界廣泛發(fā)生,嚴(yán)重影響煙草的品質(zhì)和質(zhì)量。對(duì)TMV免疫品種枯斑三生(Nicotiana tabacum var.Samsun NN)含有TMV抗性基因N。N基因具有溫度敏感性,在低于28℃時(shí),TMV侵染含有N基因的煙草能夠發(fā)生過敏反應(yīng),繼而誘發(fā)系統(tǒng)獲得抗性,而在溫度高于28℃時(shí),TMV侵染煙草表現(xiàn)為花葉癥狀,N基因?qū)MV的免疫特性喪失。本研究利用代謝組學(xué)的研究方法,在TMV侵染和未侵染條件下,研究不同溫度和TMV侵染后不同時(shí)間點(diǎn)代謝物變化來揭示對(duì)TMV免疫寄主N基因失活前后物質(zhì)的變化規(guī)律,輔以分子手段加以驗(yàn)證,并對(duì)兩種物質(zhì)(蘋果酸和γ-氨基丁酸)的誘導(dǎo)抗病性進(jìn)行了初步的研究。具體的結(jié)果如下:1、以枯斑三生煙和TMV為主要研究材料,采用代謝組學(xué)方法,系統(tǒng)研究25℃和31℃條件下,TMV未侵染和TMV侵染后12 h、24 h和48 h枯斑三生煙草的代謝輪廓差異。應(yīng)用氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù),結(jié)合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判別分析法(OPLS-DA)對(duì)不同溫度下代謝產(chǎn)物的差異性進(jìn)行分析。結(jié)果表明:GC-MS技術(shù)共檢測(cè)到49種代謝物包括氨基酸類、糖類、有機(jī)酸類、脂肪酸類、醇類以及多胺類等。在25℃常溫條件下,TMV侵染枯斑三生煙引起蘋果酸、水楊酸、γ-氨基丁酸、脯氨酸和乙醇胺等代謝物含量上調(diào),而在31℃高溫處理N基因失活后,TMV侵染導(dǎo)致蔗糖和肌醇含量下調(diào)、葡萄糖和果糖含量上調(diào)以及伴隨氨基酸類含量普遍上調(diào)。2、用熒光定量PCR的手段分析了在不同溫度下條件下,不同侵染時(shí)間點(diǎn)在代謝中重要的代謝途徑相關(guān)合成酶基因的變化,分別包括與蘋果酸代謝相關(guān)的蘋果酸脫氫酶,與GABA旁路代謝相關(guān)的谷氨酸脫氫酶和γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)移酶的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示:蘋果酸脫氫酶在25℃條件下,侵染12 h時(shí)上調(diào)最為顯著,而在31℃條件下這一時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)在24 h;谷氨酸脫氫酶在25℃條件下上調(diào)幅度大于31℃條件下;對(duì)于γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)移酶,在25℃條件下,在48 h出現(xiàn)顯著上調(diào),在31℃條件下并無顯著變化。3、從篩選到的差異性代謝物中,選取了較具有研究價(jià)值的γ-氨基丁酸和蘋果酸進(jìn)行了誘導(dǎo)抗TMV的初步研究。結(jié)果顯示:在用γ-氨基丁酸和蘋果酸誘導(dǎo)處理紅花大金元48 h后,用TMV侵染煙草植株,植株顯示了良好的抗TMV特性。γ-氨基丁酸誘導(dǎo)抗病性最適濃度為5 mmol/L,降低率為55.3%。蘋果酸誘導(dǎo)抗病性最適濃度為100 mmol/L,降低率為56.3%。
[Abstract]:Tobacco mosaic virus (TMV) infection caused by tobacco mosaic virus (TMV) is a serious tobacco disease, which is widespread in China and the world, which seriously affects the quality and quality of tobacco. There was a temperature sensitivity to the N. N gene of Nicotiana tabacum var. Samsun NN, a TMV-immunized variety. When the temperature was below 28 鈩，

本文編號(hào)：2029674