本文選題：膠孢炭疽病菌 + Cg4LysM�。� 參考：《海南大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：效應(yīng)蛋白是病原真菌的主要致病因子之一。目前關(guān)于膠孢炭疽病菌LysM型效應(yīng)蛋白的研究十分有限,本研究在前期研究的基礎(chǔ)上克隆了橡膠樹膠孢炭疽病菌的一個LysM型效應(yīng)蛋白編碼基因,命名為Cg4LysM,對其功能進(jìn)行了初步的研究,得到以下結(jié)果:本研究通過RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增了Cg4LysM基因的cDNA全長序列,測序表明,該基因含1983個堿基對,編碼一個660個氨基酸的多肽,由297個極性殘基、208個疏水基殘基、8個強堿性殘基和59個強酸性殘基。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,該蛋白含有4個保守的LysM結(jié)構(gòu)域,,不含任何跨膜結(jié)構(gòu)域,推測為胞外分泌蛋白。同源性比較分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),該蛋白與草莓膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides Nara gc5)、高粱炭疽病菌(Colletotrichum sublineola)、石膏樣小孢子菌(Microsporum gypseum CBS)的LysM蛋白同源,同源性分別為97%、59%、55%。為了研究Cg4LysM基因的功能,我們通過同源重組的方法構(gòu)建了Cg4LysM基因的敲除突變體(徐文晶等,2015;郭立佳等,2014;),命名為△Cg4LysM。對△Cg4LysM突變體的表型進(jìn)行分析,得出以下結(jié)果:(1)與野生型菌株相比,△Cg4LysM的菌落形態(tài)和孢子形態(tài)沒有明顯變化,但菌落的生長速率降低,孢子產(chǎn)量下降;(2)△Cg4LysM對蔗糖的利用增強;(3)△CgLysM對橡膠樹葉片的致病性減弱,但對寄主細(xì)胞的機(jī)械穿透力沒有變化。以上結(jié)果表明,膠孢炭疽病菌Cg4LysM基因不僅參與病原真菌的生長發(fā)育和能量代謝過程,而且與病菌的致病性相關(guān),但與真菌的機(jī)械穿透力無關(guān)。
[Abstract]:Effector protein is one of the main pathogenic factors of pathogenic fungi. At present, the research on LysM type effector protein of Gymnotrichum anthracnose is very limited. On the basis of previous studies, a LysM type effector protein encoding gene was cloned from Hevea gloeosporium anthracnose. Cg4LysM was named as Cg4LysM, and its function was preliminarily studied. The following results were obtained: the full-length cDNA sequence of Cg4LysM gene was amplified by RT-PCR. Sequencing showed that Cg4LysM gene contains 1983 base pairs and encodes a 660amino acid peptide. There are 297 polar residues, 208 hydrophobic residues, 8 strongly alkaline residues and 59 strongly acidic residues. Bioinformatics analysis showed that the protein contained four conserved LysM domains, without any transmembrane domain, and was presumed to be an extracellular secretory protein. The results of homology analysis showed that the protein was homologous to LysM protein of Colletotrichum gloeosporioides Nara, Colletotrichum sublineolaae, Microsporum gypseum CBSs of Colletotrichum sublineolaum and Microsporum gypseum CBSs, and the homology was 975955555.The protein was homologous to Colletotrichum gloeosporioides Nara Gc5, Colletotrichum sublineolaae and Microsporum gypseum CBS. In order to study the function of Cg4LysM gene, we constructed Cg4LysM knockout mutants (Xu Wenjing et al. 2015, Guo Lijia et al. 2014) and named Cg4LysM by homologous recombination. By analyzing the phenotype of Cg4LysM mutant, the following results were obtained: (1) compared with wild-type strain, Cg4LysM had no significant changes in colony morphology and spore morphology, but the growth rate of Cg4LysM decreased. The pathogenicity of CgLysM to the leaves of Hevea was weakened, but the mechanical penetration of host cells was not changed. The results showed that the Cg4LysM gene was not only involved in the growth, development and energy metabolism of pathogenic fungi, but also related to the pathogenicity of fungi, but not to the mechanical penetration of fungi.
【學(xué)位授予單位】：海南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S763.7

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本文編號：2016105