本文選題：擴(kuò)張型心肌病 + LMNA基因��； 參考：《青島大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究目的：本研究旨在通過對(duì)大樣本擴(kuò)張型心肌病(DCM)患者的LMNA基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP)的檢測,發(fā)現(xiàn)某些未報(bào)道的SNP位點(diǎn),明確其與擴(kuò)張型心肌病之間的相關(guān)性,并根據(jù)研究結(jié)果,建立真核表達(dá)載體,測定其對(duì)轉(zhuǎn)錄因子NKX2.5表達(dá)量及mRNA熒光量的影響,探討LMNA基因多態(tài)性誘發(fā)擴(kuò)張型心肌病的可能機(jī)制。研究材料及方法：1.選取合適的患者群及患者數(shù)量、提取血樣基因組,記錄患者基線資料,并對(duì)其家族成員進(jìn)行篩查、研究隨訪；進(jìn)行LMNA基因SNP的檢測,全部統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用Spss軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。相關(guān)性分析使用pearson多元逐步Logistic回歸；用配對(duì)連鎖不平衡檢驗(yàn)計(jì)算連鎖不平衡系數(shù)(coefficient of inkage disequilibrium, D'),用最大期望值法估算單倍型頻率。2.建立真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染,測定NKX2.5表達(dá)量或mRNA熒光量。結(jié)果：1.對(duì)擴(kuò)張型心肌病相關(guān)的LMNA基因SNP位點(diǎn)篩查方法的建立及樣本檢測,顯示發(fā)現(xiàn)了四個(gè)突變的SNP位點(diǎn),分別為rs4641、rs5380、s5058及Glu82Lys;,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的基因型貢獻(xiàn)率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(c 2=63.533,P=0.000),以CC型為參照,攜帶CT和TT基因的人群所患DCM的風(fēng)險(xiǎn)要顯著增加(P0.01)；f進(jìn)一步研究顯示轉(zhuǎn)染了Glu82Lys突變型的LMNA基因的細(xì)胞凋亡率、HEK293T/17系細(xì)胞蛋白(Lamin A/C)表達(dá)量均顯著大于未轉(zhuǎn)染載體、空載體及轉(zhuǎn)染了Glu82Lys野生型LMNA基因的細(xì)胞。2.通過對(duì)LMNA基因SNP對(duì)轉(zhuǎn)錄因子NKX2.5表達(dá)的影響的研究,顯示 轉(zhuǎn)染了rs4641和Glu82Lys突變(G244A)型突變基因的P19CL6細(xì)胞系Nkx2.5基因nRNA表達(dá)量水平顯著降低(P0.05),而轉(zhuǎn)染了rs4641和Glu82Lys突變(G244A)型野生基因的細(xì)胞系Nkx2.5基因mRNA表達(dá)量水平基本沒有變化(P0.05),轉(zhuǎn)染了rs5380和rs5058型突變基因的細(xì)胞系Nkx2.5基因mRNA表達(dá)量水平與轉(zhuǎn)染了rs5380和rs5058型野生基因的細(xì)胞系Nkx2.5基因mRNA表達(dá)量水平均基本沒有變化(P0.05)；f以看家基因GADPH基因表達(dá)蛋白為參照,rs4641突變型及Glu82Lys突變(G244A) LMNA基因MT組較其他組有顯著性降低。結(jié)論：1.rs4641、rs5380、rs5058三位點(diǎn)均為無意義突變,不會(huì)影響心肌細(xì)胞的收縮功能,但是rs4641突變具有評(píng)價(jià)DCM患病風(fēng)險(xiǎn)的作用；2. LMNA基因的Glu82Lys突變能夠誘發(fā)心肌細(xì)胞功能異常,還與心肌細(xì)胞的凋亡有關(guān)；3.突變的LMNA基因(主要指rs4641突變和Glu82Lys突變(G244A)存在時(shí)細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5表達(dá)明顯降低,顯示LMNA基因與轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5表達(dá)存在關(guān)聯(lián),LMNA基因可能通過對(duì)轉(zhuǎn)錄因子的干預(yù)誘導(dǎo)DCM的發(fā)生。
[Abstract]:Objective: to detect the single nucleotide polymorphisms (SNPs) of LMNA gene in patients with dilated cardiomyopathy (DCM) in a large sample and to find out some unreported SNP loci and to determine the correlation between LMNA and dilated cardiomyopathy. Based on the results of the study, the eukaryotic expression vector was established to determine the expression of NKX2.5 and mRNA fluorescence, and to explore the possible mechanism of LMNA gene polymorphism inducing dilated cardiomyopathy. Research materials and methods: 1. Selected the appropriate patient group and patient number, extracted the blood sample genome, recorded the patient baseline data, and screened the family members, followed up the study; carried out the detection of LMNA gene SNP, all statistical data were analyzed by SPSS software. The correlation analysis used pearson multivariate stepwise logistic regression, the matched linkage disequilibrium test was used to calculate the linkage disequilibrium coefficient and the maximum expectation method was used to estimate the haplotype frequency. The eukaryotic expression vector was established and transfected. NKX 2.5 expression or mRNA fluorescence was measured. The result is 1: 1. The method for screening SNP loci of LMNA gene associated with dilated cardiomyopathy and the detection of the SNP loci of the LMNA gene showed that four mutation SNP loci were found. Rs4641, rs5380, S5058 and Glu82LysA, respectively. The genotypic contribution rates of the experimental group and the control group were significantly different from those of the control group. The risk of DCM in patients with CT and TT gene was significantly increased. Further study showed that the apoptosis rate of LMNA gene transfected with Glu82Lys mutant gene and the expression of HEK 293T / 17 cell protein were significantly higher than those of untransfected vector. Empty vector and transfected Glu82 Lys wild-type LMNA gene. The effect of LMNA gene SNP on the expression of transcription factor NKX2.5 was studied. The expression level of nRNA of Nkx2.5 gene was significantly decreased in P19CL6 cell line transfected with rs4641 and Glu82Lys mutant gene G244A, but the expression level of Nkx2.5 gene was almost unchanged in the cell line transfected with rs4641 and Glu82Lys mutant G244A) type wild gene. The mRNA expression level of Nkx2.5 gene in the cell line transfected with rs5380 and rs5058 mutant gene and the expression level of Nkx2.5 gene in the cell line transfected with rs5380 and rs5058 type wild genes were basically unchanged. Compared with the other groups, the MT group of LMNA gene of Glu82Lys mutation and Glu82Lys mutation was significantly lower than that of the other groups in reference to rs4641 mutation and Glu82Lys mutant G244A. Conclusion: 1. The three loci of rs4641, rs5380 and rs5058 are all meaningless mutations, which will not affect the contractile function of cardiomyocytes, but rs4641 mutation can evaluate the risk of DCM. The Glu82Lys mutation of LMNA gene can induce cardiac myocyte dysfunction and may be related to cardiomyocyte apoptosis. The expression of transcription factor Nkx2.5 was significantly decreased in the presence of mutant LMNA gene (mainly rs4641 mutation and Glu82Lys mutant G244A), indicating that LMNA gene and transcription factor Nkx2.5 expression were associated with LMNA gene, which might be induced by interference with transcription factor.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R542.2

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本文編號(hào)：2007395