本文選題：酪氨酸激酶 + 膠質(zhì)瘤��； 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：隨著醫(yī)療檢查技術(shù)的不斷進(jìn)步,中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)瘤的發(fā)現(xiàn)率逐年提高,近年來已不再被認(rèn)為是罕見病。然而,膠質(zhì)瘤的治療手段卻處于瓶頸,療效仍然與30年前報道的數(shù)據(jù)未有明顯的提高。所以,尋找新的膠質(zhì)瘤治療方法迫在眉睫。sparse representation-based classifier(Src)基因是人類最早發(fā)現(xiàn)的原癌基因,其蛋白產(chǎn)物Src是體內(nèi)分布最為廣泛的蛋白激酶,其通過磷酸化細(xì)胞內(nèi)多種信號分子,實現(xiàn)參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化等一系列生理活動。在結(jié)腸癌,乳腺癌和前列腺癌中,Src的表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度呈正性相關(guān)。然而,對Src在膠質(zhì)瘤中的作用仍然未有研究。本研究中,作者試圖探尋Src在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及調(diào)節(jié)機(jī)制,并明確Src對膠質(zhì)瘤的腫瘤特性所起的生物學(xué)作用。首先我們發(fā)現(xiàn),Src蛋白在臨床膠質(zhì)瘤患者手術(shù)標(biāo)本中的表達(dá)較正常腦組織顯著提高(P0.05),其中低級別(WHO III級)和高級別膠質(zhì)瘤(WHO IIIIV級)分別較正常腦組織高出80%和190%,且高級別Src顯著高于低級別膠質(zhì)瘤(P0.05)。與此同時,Src的失活型蛋白表型Try530-P-Src表達(dá)水平與正常腦組織無明顯差異(P0.05),但Try530-P-Src/Src比值較正常腦組織出現(xiàn)顯著下降(P0.05)。同時,我們觀察到,Src蛋白“開關(guān)”位點Try530的特異性調(diào)節(jié)蛋白CSK在低級別和高級別膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平分別僅為正常腦組織的46%和39%(P0.01)。以上數(shù)據(jù)提示膠質(zhì)瘤中,Src的表達(dá)水平和相對活性在膠質(zhì)瘤中顯著升高,且升高程度與膠質(zhì)瘤病理分級成正比。這種病理性的Src相對活性增強(qiáng)主要由于膠質(zhì)瘤內(nèi)Src蛋白功能調(diào)節(jié)異常所致。隨后,我們再依據(jù)膠質(zhì)瘤患者手術(shù)標(biāo)本中的Src,Try530-P-Src和CSK蛋白表達(dá)水平,對患者的預(yù)后做了評估。我們發(fā)現(xiàn),Src低表達(dá)的總體生存期和疾病無進(jìn)展生存期的中位時間分別為18個月和16個月,而高表達(dá)組為13和9個月,兩組間均存在顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。相反,Try530-P-Src低表達(dá)和高表達(dá)組的總體生存期中位時間分別為10個月和12個月(P0.05),疾病無進(jìn)展生存期中位時間為5個月和11個月(P0.05)。以上數(shù)據(jù)顯示膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后與Src的表達(dá)量成反比,而與Try530-P-Src成正比,提示Src高表達(dá)是預(yù)后不良指標(biāo)。為了進(jìn)一步明確Src對于膠質(zhì)瘤的影響,我們在U-138MG膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中制作了三組不同活性的Src的細(xì)胞系,分別為CSK miRNA處理組,Src特異性抑制劑Saracatinib組,和空白對照組。比較發(fā)現(xiàn),Saracatinib組細(xì)胞對于替莫唑胺的反應(yīng)敏感度顯著增加,IC50由對照組544.8 uM(95%可信區(qū)間:138.2 2148 uM)變?yōu)?4.05 uM(95%可信區(qū)間:2.55 77.45 uM)。然而CSK miRNA的IC50卻變?yōu)?,666uM(三組間P0.05)。然后,在細(xì)胞劃痕實驗中,Saracatinib組和CSK miRNA在第5天的侵襲速度范圍較對照組出現(xiàn)顯著降低和升高(三組間P0.05),且這個趨勢在第14天同樣維持。隨后,我們比較細(xì)胞系的遷移能力,Saracatinib組合和CSK miRNA處理組中的遷移能力分別為298+64 cell/mm2和281+71 cell/mm2。分別顯著低于和高與對照組P0.05)。最后,我們采用比較了三組間促生長相關(guān)蛋白EGFRvlll和p53的表達(dá)情況,我們發(fā)現(xiàn)在Saracatinib處理組中,U-138MG細(xì)胞EGFRvlll和p53相對表達(dá)量分別為對照組的76%+9.5%和138%+14%(P0.05)。相比較,在CSK miRNA處理組中,EGFRvlll和p53表達(dá)量分為對照組的150%+7.1%和65%+16%(P0.05)。以上數(shù)據(jù)提示Src可顯著增加膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性行為。為了驗證Src對于EGFRvlll和p53基因的確切性,我們采用了染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)對EGFRvlll和p53基因的啟動組上抑制性組蛋白H3K27Me2進(jìn)行了檢測。我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)U-138MG細(xì)胞經(jīng)過Saracatinib處理后,H3K27Me2在EGFRvlll基因的啟動子的聚集程度顯著提高,為正常時的1.2倍(P0.01)而在p53的啟動子上顯著下降(0.24+0.2,P0.01)。相反,當(dāng)U-138MG細(xì)胞經(jīng)過CSK miRNA處理后,H3K27Me2在EGFRvlll基因的啟動子的聚集程度顯著降低(0.77+0.11,P0.05),而在p53的啟動子上顯著上升(3.9+0.7,P0.05)。綜上所述,Src作為經(jīng)典的原癌基因,在本文中首次被報道在膠質(zhì)瘤中存在表達(dá)水平,功能水平和調(diào)節(jié)水平三個層面的異常。本研究發(fā)現(xiàn)在膠質(zhì)瘤臨床標(biāo)本中,Src的表達(dá)明顯高于正常腦組織,且隨腫瘤級別增高明顯增多,表達(dá)量與患者生存期呈負(fù)相關(guān)。在U138MG細(xì)胞系中,干擾Src的表達(dá)能后抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移,而且能夠促進(jìn)腫瘤對替莫唑胺的敏感性。表明Src可能成為膠質(zhì)瘤治療的新靶點。以上特質(zhì)使得Src極有可能成為膠質(zhì)瘤新的靶向治療靶點。
[Abstract]:At the same time , the expression level and the relative activity of src in glioma were significantly higher than those in normal brain tissues ( P0.05 ) . IC50鐢卞鐓х粍544.8 uM(95%鍙俊鍖洪棿:138.2 2148 uM)鍙樹負(fù)14.05 uM(95%鍙俊鍖洪棿:2.55 77.45 uM). However , the IC50 of CSK miRNA changed to 5,666uM ( P0.05 ) . We found that the expression of EGFRvlll and p53 in the treatment group was 76 % + 9.5 % and 138 % + 16 % ( P0.05 ) . On the contrary , when the U - 138MG cells were treated with CSK miRNA , the degree of aggregation of H3K27Me2 promoter in the EGFRvlll gene was significantly decreased ( 0.77 + 0.11 , P0.05 ) , while the promoter of p53 was significantly increased ( 3.9 + 0.7 , P0.05 ) . In conclusion , as a classical proto - oncogene , the expression level , functional level and level of regulation in glioma have been reported for the first time in glioma .
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1998924