本文選題：Lgr5 + 食管鱗癌　； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景食管癌作為世界上第八大常見的惡性腫瘤,死亡率占世界第六位。在亞洲,食管鱗癌作為最主要的組織學(xué)類型,其5年生存率30%。目前主要以化療,放療,手術(shù),靶向療法來治療食管鱗癌,但許多食管鱗癌病人仍出現(xiàn)疾病的復(fù)發(fā)、進展和較差的預(yù)后。越來越多的證據(jù)證實腫瘤干細胞會導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、進展、治療耐藥和遠距離轉(zhuǎn)移。腫瘤干細胞被認為是腫瘤組織中具有自我更新增殖、多向分化的潛能以及可導(dǎo)致腫瘤形成進展的生物學(xué)特性的一小部分未分化細胞。大量證據(jù)證實富集和維持腫瘤干細胞特性可以通過低粘附無血清懸浮培養(yǎng)形成成球細胞實驗、流式細胞分選術(shù)分離腫瘤干細胞實驗、腫瘤干細胞特異性表面標記物來獲得。Lgr5作為一種G蛋白偶聯(lián)受體,是Wnt信號通路的靶向調(diào)節(jié)基因。Lgr5由17個富含亮氨酸的重復(fù)單位和7個跨膜區(qū)域組成,具有GPCRs家族的典型特征。Barker等學(xué)者發(fā)現(xiàn)Lgr5表達于小腸和結(jié)腸的隱窩底部,經(jīng)過單一分選的Lgr5表達陽性的隱窩底柱狀細胞可以形成隱窩絨毛類器官。因此證實Lgr5可被認為是小腸干細胞和結(jié)腸干細胞的特異性標記物。近年來研究發(fā)現(xiàn)Lgr5在多種腫瘤中呈高表達,如結(jié)腸癌、肝癌、卵巢癌、腦膠質(zhì)瘤、基底細胞癌和胃癌等。Wnt/β-catenin信號通路在正常干細胞以及腫瘤干細胞中均起著至關(guān)重要的作用,同時被異常激活的Wnt/β-catenin通路與食管鱗癌等腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。目的1.探討分析干性基因Lgr5在食管鱗癌組織、食管鱗癌細胞和具有干性較強的食管鱗癌成球細胞中的表達及臨床意義;2.通過腫瘤干細胞相關(guān)基因在食管鱗癌成球細胞中的過高表達和較高的裸鼠體內(nèi)成瘤能力證實食管鱗癌成球細胞具備較高的干細胞特性;3.采用siRNA使Lgr5的表達降低,分析食管鱗癌細胞的增殖、遷移、侵襲能力、干細胞基因表達以及Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)分子表達能力的變化。方法采用免疫組織化學(xué)法(IHC)檢測280例食管鱗癌組織和150例癌旁組織中Lgr5的蛋白表達水平;Kaplan-Meier分析法分析食管鱗癌患者的生存預(yù)后;低黏附懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)食管鱗癌細胞系KYSE450形成成球細胞;Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)、Western Blot法檢測干性相關(guān)基因以及Lgr5在親代細胞和成球細胞中的表達差異;BALB/c裸鼠體內(nèi)注射親代細胞和成球細胞檢測成球細胞干性;應(yīng)用Lgr5 siRNA瞬時轉(zhuǎn)染KYSE450細胞系后,CCK8檢測細胞增殖、Transwell實驗檢測細胞的遷移和侵襲能力,qRT-PCR、Western Blot法檢測干性相關(guān)基因和Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)分子的表達水平變化。結(jié)果1.Lgr5在食管鱗癌組織中的表達水平明顯高于癌旁正常食管組織;且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、腫塊大小、分化程度、腫瘤分期和較差的預(yù)后密切相關(guān);2.在食管鱗癌成球細胞中Lgr5和腫瘤干細胞相關(guān)基因均呈高表達水平;3.體內(nèi)實驗證實成球細胞具有較高的致瘤能力;4.沉默Lgr5的表達可以抑制食管鱗癌細胞的增殖、遷移、侵襲能力;5.沉默Lgr5的表達可以降低腫瘤干細胞相關(guān)基因SOX2、ALDH1A1、NANOG的表達;6.沉默Lgr5的表達可以降低β-catenin及其Wnt/β-catenin信號通路重要的分子cyclinD1、c-Myc的表達。結(jié)論Lgr5可能是食管鱗癌發(fā)生、復(fù)發(fā)、進展、侵襲轉(zhuǎn)移的標志之一,Lgr5呈高表達的食管鱗癌細胞可能具有腫瘤干細胞樣特性,并且可能通過Wnt/β-catenin信號通路調(diào)節(jié)食管鱗癌的干性。因此,Lgr5可能為食管鱗癌干細胞的一個重要表面標記物,并且可能成為治療食管鱗癌的一個重要分子靶點。
[Abstract]:In recent years , the expression of Lgr5 in esophageal squamous cell carcinoma ( SCC ) , esophageal squamous cell carcinoma ( SCC ) and esophageal squamous cell carcinoma ( SCC ) has been demonstrated . Conclusion Lgr5 may be an important marker of esophageal squamous cell carcinoma , and may be an important molecular target for the treatment of esophageal squamous cell carcinoma .
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.1

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Side population cells isolated from KATO Ⅲ human gastric cancer cell line have cancer stem cell-like characteristics[J];World Journal of Gastroenterology;2012年33期

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本文編號：1981452