本文選題：大麗輪枝菌 + 漆酶��； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：大麗輪枝菌是一種典型的土傳病原真菌,寄主范圍廣泛。微菌核是大麗輪枝菌的主要休眠結(jié)構(gòu),抗逆性強(qiáng),可在沒有寄主的情況下存活14年,這與其體內(nèi)含有豐富的黑色素密切相關(guān)。黑色素是一種由酚類或吲哚類化合物組成的帶有負(fù)電荷的疏水性高分子聚合物,能夠保護(hù)真菌免受環(huán)境和寄主的影響。漆酶是黑色素合成通路中的關(guān)鍵酶,在真菌生長(zhǎng)發(fā)育的過程中發(fā)揮著重要的作用。本文通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化和PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法對(duì)大麗輪枝菌中的漆酶基因VdLac進(jìn)行了敲除和互補(bǔ),研究漆酶基因在大麗輪枝菌中的主要功能。結(jié)果如下:1.根據(jù)NCBI上已公布的VdLs.17的基因組序列,克隆得到漆酶基因VdLac序列,VdLac基因全長(zhǎng)1978 bp,c DNA序列全長(zhǎng)1713 bp,編碼570個(gè)氨基酸。2.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法(ATMT)對(duì)VdLac進(jìn)行敲除,并通過潮霉素抗性篩選和PCR檢測(cè)確定陽性敲除突變體,獲得了4個(gè)敲除突變體。3.通過PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法將互補(bǔ)質(zhì)粒隨機(jī)插入到敲除突變體中,經(jīng)G418抗性篩選和PCR檢測(cè)確定了1株陽性互補(bǔ)突變體。4.通過對(duì)敲除和互補(bǔ)突變體進(jìn)行一系列的生物學(xué)功能測(cè)定,分析漆酶基因的功能。結(jié)果表明,VdLac基因缺失突變體對(duì)硝化壓力更敏感,其在CM培養(yǎng)基上仍可產(chǎn)生漆酶,但產(chǎn)生漆酶的能力有所降低;VdLac基因不影響菌株的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)、產(chǎn)孢能力、致病力以及黑色素合成。
[Abstract]:Verticillium dahliensis is a typical soil-borne pathogenic fungus with a wide range of hosts. Microsclerotia is the main dormant structure of Rhizoctonia dahliensis, which has strong resistance to stress and can survive for 14 years without host, which is closely related to the rich melanin in its body. Melanin is a negatively charged hydrophobic polymer composed of phenols or indole compounds, which can protect fungi from environmental and host effects. Laccase is a key enzyme in melanin synthesis pathway and plays an important role in the growth and development of fungi. The laccase gene VdLac was knockout and complementary by Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation and PEG mediated protoplast transformation, and the main function of laccase gene was studied. The result is as follows: 1. According to the genomic sequence of VdLs.17 published on NCBI, the VdLac sequence of laccase gene was cloned. The total length of 1978 BP DNA sequence of laccase gene was 1713 BP, encoding 570 amino acids. 2. VdLac knockout was carried out by Agrobacterium tumefaciens mediated genetic transformation method. Four knockout mutants were obtained by hygromycin resistance screening and PCR detection. The complementary plasmids were randomly inserted into the knockout mutants by PEG mediated protoplast transformation. A positive mutants. 4 was identified by G418 resistance screening and PCR detection. The function of laccase gene was analyzed by a series of biological functions of knockout and complementary mutants. The results showed that the mutant of VdLac gene was more sensitive to nitrification pressure, and laccase was still produced in CM medium, but the ability of laccase production could not affect the vegetative growth, sporulation ability, pathogenicity and melanin synthesis of the strain.
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S432.44

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本文編號(hào)：1974262