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中國南瓜內(nèi)參基因18S rRNA的克隆及其引物開發(fā)

發(fā)布時(shí)間:2018-05-25 21:58

  本文選題:中國南瓜 + S; 參考:《西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2017年03期


【摘要】:【目的】克隆獲得中國南瓜18SrRNA,并設(shè)計(jì)合適的熒光定量PCR內(nèi)參,為開展中國南瓜重要功能基因的表達(dá)模式和調(diào)控機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)!痉椒ā恳灾袊瞎稀鼙尽贩N的基因組DNA為模板,通過PCR方法克隆中國南瓜18SrRNA基因序列,再利用Primer Premier軟件設(shè)計(jì)熒光定量PCR引物,對(duì)該內(nèi)參基因在中國南瓜不同組織、生長(zhǎng)階段及非生物脅迫條件下的表達(dá)穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)!窘Y(jié)果】首次克隆得到中國南瓜18SrRNA基因序列,其長(zhǎng)度為1 857bp,GenBank登錄號(hào)為KM979454,該基因與西瓜、西葫蘆等瓜類蔬菜18SrRNA基因同源性大都在90%以上;以中國南瓜內(nèi)參基因18SrRNA核苷酸全長(zhǎng)序列為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)1對(duì)熒光定量PCR引物,以中國南瓜果肉總RNA逆轉(zhuǎn)錄的cDNA第一鏈為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,該引物擴(kuò)增的片段大小為132bp,擴(kuò)增效率高,特異性強(qiáng);18SrRNA基因在中國南瓜不同組織、生長(zhǎng)發(fā)育階段及非生物脅迫條件下均能穩(wěn)定表達(dá)。【結(jié)論】克隆獲得中國南瓜18SrRNA基因,該基因適合在中國南瓜基因表達(dá)研究中作為內(nèi)參基因。
[Abstract]:[objective] to clone and obtain 18s rRNA from Chinese pumpkin, and to design a suitable fluorescent quantitative PCR internal reference. [methods] the genomic DNA of Chinese pumpkin 'Miamoto' was used as a template to clone the 18SrRNA gene sequence of Chinese pumpkin by PCR. Then the fluorescent quantitative PCR primers were designed with Primer Premier software to detect the expression stability of the internal reference gene in different tissues, growth stages and abiotic stress conditions of Chinese pumpkin. [results] the 18SrRNA gene sequence of Chinese pumpkin was cloned for the first time. Its length is 1 857 BP GenBank accession number is KM979454, the homology of this gene with watermelon, squash and other melon vegetable 18SrRNA gene is more than 90%, based on the full-length 18SrRNA sequence of Chinese pumpkin internal reference gene, a pair of fluorescent quantitative PCR primers were designed. The first cDNA strand of total RNA reverse transcription in Chinese pumpkin pulp was used as template for PCR amplification. The amplified fragment size was 132bp. the amplification efficiency was high and the specificity of 18s rRNA gene was strong in different tissues of Chinese pumpkin. [conclusion] the Chinese pumpkin 18SrRNA gene was obtained by cloning, which is suitable for the study of Chinese pumpkin gene expression as an internal reference gene.
【作者單位】: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所;福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究中心;福建省蔬菜工程技術(shù)研究中心;福建省種植業(yè)技術(shù)推廣總站;
【基金】:福建省屬公益類科研院所基本科研專項(xiàng)(2015R1026-3) 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)PI項(xiàng)目(2016PI-40) 福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2015J01118)
【分類號(hào)】:S642.1

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本文編號(hào):1934790

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