本文選題：黃曲霉毒素B(AFB) + 單鏈抗體(scFv)��； 參考：《南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)》2017年11期

【摘要】：【目的】克隆構(gòu)建黃曲霉毒素B1(AFB1)單鏈抗體(scFv)基因,并對其編碼蛋白序列和結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析預(yù)測,為scFv分子修飾改造及在免疫學(xué)檢測中的應(yīng)用提供參考依據(jù)�！痉椒ā恳钥笰FB1單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株為原料,通過PCR擴(kuò)增重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL),以(Gly4Ser)3為柔性接頭(Linker)拼接構(gòu)建抗AFB1 scFv基因,并采用在線生物信息學(xué)分析軟件對其氨基酸序列、理化性質(zhì)及蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析預(yù)測。【結(jié)果】抗AFB1 scFv基因全長744 bp,編碼248個氨基酸,分子量為26312.05 Da,理論等電點(diǎn)(pI)5.70,其二級結(jié)構(gòu)中含有35個α-螺旋(占14.11%)、28個β-折疊(占11.29%)、85個延伸鏈(占34.28%)和100個隨機(jī)卷曲(占40.32%),在三級結(jié)構(gòu)中連接肽卷曲將VH和VL區(qū)域牽拉而相互靠近,形成典型的抗體結(jié)構(gòu)——溝槽結(jié)構(gòu),是scFv的抗原結(jié)合區(qū)域。【結(jié)論】構(gòu)建的抗AFB1 scFv其VH含有117個氨基酸、VL含有116個氨基酸,具備典型抗體結(jié)構(gòu)——溝槽結(jié)構(gòu),能與抗原特異性結(jié)合。
[Abstract]:[objective] to clone and construct aflatoxin B1 AFB1 single chain antibody (scFv1) gene, and to analyze and predict its protein sequence and structure. To provide reference for the modification of scFv molecule and its application in immunological detection. [methods] hybridoma cell lines with monoclonal antibody against AFB1 were used as raw materials. The heavy chain variable region (VH) and the light chain variable region (PCR) were amplified by PCR. The AFB1 scFv resistant gene was constructed by using Gly4Serf3 as the flexible connector. The amino acid sequence was analyzed by online bioinformatics software. Physical and chemical properties and protein structure were analyzed and predicted. [results] the total length of AFB1 scFv gene was 744 BP, encoding 248 amino acids. The molecular weight is 26312.05 Da. the theoretical isoelectric point Pi is 5.70. Its secondary structure contains 35 偽 -helices (14.11), 28 尾 -folds (11.29%), 85 extension chains (34.28%) and 100 random curls (40.32%). In the tertiary structure, the peptide curls draw the VH and VL regions close to each other. The antigen-binding region of scFv is formed by forming a typical antibody structure. [conclusion] the constructed anti-VH has 117 amino acids, and VL contains 116 amino acids, and has a typical antibody structure -groove structure. Can bind to antigen specifically.
【作者單位】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院;四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31601539) 湖北省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2016CFB143) 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)自主科技創(chuàng)新基金項(xiàng)目(2662015QD027)
【分類號】：R446.6

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本文編號：1926766