番茄SlWDR141基因的克隆及功能研究
本文選題:植物生理與分子生物學(xué) + WD蛋白。 參考:《中國科技論文》2017年06期
【摘要】:為研究番茄WD40蛋白基因(SlWDR141)的功能,對SlWDR141蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)SlWDR141蛋白在進(jìn)化過程中高度保守,與土豆的同源性最高。在克隆SlWDR141基因全長序列的基礎(chǔ)上,構(gòu)建了亞細(xì)胞定位和酵母雙雜交表達(dá)載體,證實(shí)SlWDR141蛋白主要定位在細(xì)胞核中,與DDB1具有相互作用。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)分析SlWDR141基因在組織中的表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)它在各個(gè)組織中均有表達(dá),但在根中的表達(dá)量最高。為研究該基因的生物學(xué)功能,進(jìn)一步構(gòu)建了SlWDR141基因的干涉載體,用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化番茄得到轉(zhuǎn)基因陽性番茄,熒光定量PCR鑒定出3個(gè)表達(dá)量下調(diào)的獨(dú)立轉(zhuǎn)基因株系。NaCl脅迫和Pst DC3000侵染野生型和轉(zhuǎn)基因植株發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)基因植株相對于野生型植株抗鹽性和抗病性均下降,表明SlWDR141基因?qū)}脅迫和細(xì)菌侵染均起正調(diào)控作用。
[Abstract]:In order to study the function of tomato WD40 protein gene SlWDR141, the bioinformatics analysis of SlWDR141 protein showed that SlWDR141 protein was highly conserved in evolution and had the highest homology with potato. Based on the cloning of full-length SlWDR141 gene, subcellular localization and yeast two-hybrid expression vectors were constructed. It was confirmed that the SlWDR141 protein was mainly located in the nucleus and interacted with DDB1. Real-time fluorescence quantitative PCR(real-time PCR was used to analyze the expression profile of SlWDR141 gene in tissues. It was found that SlWDR141 gene was expressed in all tissues, but the highest expression level was found in roots. In order to study the biological function of the gene, the interference vector of SlWDR141 gene was constructed and transformed into tomato by Agrobacterium tumefaciens to obtain transgenic tomato. Three down-regulated independent transgenic lines. NaCl stress and Pst DC3000 infected wild and transgenic plants were identified by fluorescence quantitative PCR. The results showed that the salt resistance and disease resistance of transgenic plants were decreased compared with wild type plants. The results suggest that SlWDR141 gene plays a positive role in both salt stress and bacterial infection.
【作者單位】: 四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;生物資源與生態(tài)環(huán)境教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;水力學(xué)與山區(qū)河流開發(fā)保護(hù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;合肥工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院;
【基金】:高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助項(xiàng)目(20110181130009)
【分類號】:Q943.2;S641.2
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,本文編號:1925507
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