本文選題：羊口瘡病毒 + 基因　； 參考：《安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年05期

【摘要】：羊口瘡是由口瘡病毒(orf virus,ORFV)引起的接觸性、嗜上皮性的傳染病。020基因是該病毒重要的酶活力調(diào)節(jié)蛋白。根據(jù)Gen Bank中020基因的序列設(shè)計(jì)引物,從ORFV-F10株感染的病料中提取DNA,PCR擴(kuò)增獲得目的基因。然后將其亞克隆至p ET-32a(+)原核表達(dá)載體,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-32a-ORF-020。鑒定正確后轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)細(xì)胞,進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE和Western-blot分析。最后將純化的020蛋白免疫BALB/c雌鼠,制備多抗血清。SDS-PAGE結(jié)果表明,ORFV 020基因在體外獲得正確表達(dá),大小約37 k Da。Western-blot結(jié)果表明,制備的多抗血清能夠與020蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)具有良好的反應(yīng)原性。
[Abstract]:Sheep mouth ulcer is caused by orf virus ORFV. The epitheliophilic infectious disease. 020 gene is an important enzyme activity regulating protein of the virus. According to the sequence of 020 gene in Gen Bank, primers were designed and the target gene was amplified from the infected material of ORFV-F10 strain. Then it was subcloned into prokaryotic expression vector pET-32a (), and the recombinant expression plasmid pET-32a-ORF-020 was constructed. After the correct identification, the BL21 receptive cells were transformed and IPTG induced expression was carried out. The expressed products were analyzed by SDS-PAGE and Western-blot. Finally, the purified 020 protein was immunized with BALB/c female mice, and the polyantiserum. SDS-PAGE results showed that the ORFV020 gene was correctly expressed in vitro, and the size was about 37 k Da.Western-blot. The prepared polyclonal antibody serum can react specifically with 020 protein.
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;安徽華澳生物技術(shù)有限公司;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31602063) 安徽省自然科學(xué)基金(1508085QC60) 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)穩(wěn)定和引進(jìn)人才科研項(xiàng)目(yj2015-16);安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新基金項(xiàng)目共同資助
【分類號(hào)】：S852.65

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