本文選題：禽流感(AI) + 傳染性法氏囊病(IBD)　； 參考：《農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)》2017年07期

【摘要】：禽流感(Avian influenza,AI)和傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)嚴(yán)重危害家禽養(yǎng)殖業(yè),疫苗免疫是防治的主要手段之一。為探索以鴨瘟病毒(Duck enteritis virus,DEV)(又稱(chēng)鴨病毒性腸炎病毒)為載體,研制在雞(Gallus gallus)中使用的AI-IBD二聯(lián)疫苗的可行性,本研究利用overlap PCR及Gateway LR克隆技術(shù),擴(kuò)增出血凝素(hemagglutinin,HA)-內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(internal ribosome entry site,IRES)-病毒蛋白2(virus protein 2,VP2)和VP2-IRES-HA基因片段,并將其克隆入DEV多片段拯救系統(tǒng)T-us78Kan ccd B粘粒短獨(dú)特區(qū)7(unique short region 7,US7)和US8位點(diǎn)之間,利用該系統(tǒng)成功拯救出兩株共表達(dá)H5亞型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)HA基因和傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)VP2基因的重組病毒r DEV-HA/VP2和r DEV-VP2/HA,并對(duì)其進(jìn)行了初步免疫效果評(píng)價(jià)。經(jīng)系統(tǒng)體外實(shí)驗(yàn)表明,病毒傳至20代,外源基因均能在重組病毒中穩(wěn)定遺傳和表達(dá),且不影響載體病毒的增殖。但免疫效力實(shí)驗(yàn)顯示,重組病毒以103半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量(tissue culture infective dose,TCID50)、104TCID50、105TCID50免疫雞后14 d,r DEV-HA/VP2最高僅誘導(dǎo)對(duì)同源AIV強(qiáng)毒70%的免疫保護(hù)和對(duì)超強(qiáng)IBDV(very virulent IBDV,vv IBDV)30%的免疫保護(hù),部分雞中能檢測(cè)到血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)抗體,但整體水平較低,IBD抗體未檢測(cè)到;r DEV-VP2/HA最高僅誘導(dǎo)對(duì)vv IBDV 40%的免疫保護(hù),不能誘導(dǎo)對(duì)同源AIV強(qiáng)毒的免疫保護(hù),HI抗體和IBD抗體均未檢測(cè)到。結(jié)果顯示,以IRES串聯(lián)基因構(gòu)建鴨瘟載體禽流感傳染性法氏囊病二聯(lián)疫苗的策略不可行。本研究為以DEV為載體構(gòu)建在雞中使用的多聯(lián)疫苗的研究提供參考資料。
[Abstract]:Avian influenza (Avian influenza, AI) and infectious bursal disease (Infectious bursal disease, IBD) seriously harm the poultry breeding industry. Vaccine immunity is one of the main means of prevention and control. In order to explore the duck plague virus (Duck enteritis virus, DEV) (also known as duck viral enteritis virus) as the carrier, the two couplet used in chicken (Gallus) is developed. The feasibility of the vaccine was amplified by overlap PCR and Gateway LR cloning technology to amplify the hemagglutinin (HA) - internal ribosome entry site (internal ribosome entry site, IRES) - virus protein 2 (virus 2) and gene fragment Between the unique region 7 (unique short region 7, US7) and the US8 site, the system successfully rescued two strains of H5 subtype avian influenza virus (Avian influenza virus, AIV) HA gene and the recombinant virus of the infectious bursal disease virus. Preliminary immune evaluation. In vitro experiments showed that the virus was transmitted to 20 generations, and the exogenous genes were stable and expressed in the recombinant virus without affecting the proliferation of the virus, but the immunological efficacy experiment showed that the recombinant virus was cultured in 103 half of the tissues (tissue culture infective dose, TCID50), 104TCID50105TCID50 After immunizing chickens, 14 d, R DEV-HA/VP2 only induced immune protection to 70% of homologous AIV and 30% of ultra strong IBDV (very virulent IBDV, VV IBDV). In some chickens, the blood coagulation inhibition (hemagglutination inhibition) antibody was detected, but the whole level was low and the antibody was not detected. 40% immune protection did not induce immunity protection against the homologous AIV, and both HI and IBD antibodies were not detected. The results showed that the strategy of constructing the two joint vaccine of avian influenza infectious bursal disease by using IRES tandem gene was not feasible. This study provides a reference for the study of the multi joint vaccine used in chicken with DEV as the carrier. Information.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所/獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)部動(dòng)物流感重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室;甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;
【基金】：哈爾濱市應(yīng)用技術(shù)研究與開(kāi)發(fā)項(xiàng)目(2013AA6BN001)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：1922608