本文選題：豬鏈球菌型 + 溶血素��； 參考：《生物技術》2017年01期

【摘要】：[目的]構建豬鏈球菌2型05ZYH33溶血素sly基因敲除突變株,比較突變株與野生株生物學特征。[方法]分別克隆sly上游序列L、下游序列R和壯觀霉素抗性基因spcr,構建基因敲除質粒p UC18-LSR,并電轉化入05ZYH33感受態(tài)細菌。用多重PCR、RT-PCR及Southern雜交對sly基因敲除突變株進行鑒定。比較突變株與野生株的生長速率和溶血現象。[結果]多重PCR和RT-PCR分別顯示,野生株DNA和c DNA都能擴增出579 bp的sly內部片段,而突變株DNA和c DNA都未能擴增出此片段。Southern雜交顯示,突變株中未見sly探針雜交條帶。突變株生長速率較野毒株遲緩,溶血能力減弱,但依然存在。[結論]建立了高效穩(wěn)定的電轉化方法,成功構建出溶血能力減弱的雙交換同源重組sly基因敲除突變株。
[Abstract]:[objective] to construct Streptococcus suis type 2 05ZYH33 hemolysin sly knockout mutant and compare the biological characteristics between the mutant and wild strain. [methods] the upstream sequence of sly, the downstream sequence R and the spectinomycin resistant gene spcrs were cloned, and the gene knockout plasmid pUC18-LSRR was constructed and transformed into 05ZYH33 receptive bacteria. Multiplex PCR RT-PCR and Southern hybridization were used to identify the sly gene knockout mutant. The growth rate and hemolysis of mutant and wild plant were compared. [results] Multiplex PCR and RT-PCR showed that both DNA and c DNA could amplify 579bp sly internal fragment, but DNA and c DNA could not amplify the fragment. Southern blotting showed that there was no sly probe hybridization band in the mutant. The growth rate of mutant strain was slower than that of wild strain, and the hemolysis ability was weakened, but still existed. [conclusion] an efficient and stable electroporation method was established, and a double exchange homologous recombinant sly knockout mutant with weakened hemolytic capacity was successfully constructed.
【作者單位】： 揚州科技學院醫(yī)學院;中國人民解放軍南京軍區(qū)軍事醫(yī)學研究所流行病室;
【基金】：國家自然科學基金-青年科學基金項目(“轉錄調節(jié)因子Rgg與環(huán)境因素對2型豬鏈球菌89K致病島的交互調控研究”;No.31300119)
【分類號】：S852.611

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