本文選題：草魚 + 核因子E相關(guān)因子(Nrf)��； 參考：《水產(chǎn)學(xué)報》2018年02期

【摘要】：呼吸爆發(fā)過程可以產(chǎn)生大量的活性氧,核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)在此過程中起著重要作用。實驗克隆和分析了草魚的Nrf2基因,隨后制備了Nrf2蛋白的多克隆抗體,研究了其和呼吸爆發(fā)的關(guān)系。草魚Nrf2基因cDNA長度為1994 bp,開放閱讀框為1782 bp,編碼593個氨基酸(aa)。氨基酸序列比對發(fā)現(xiàn),草魚Nrf2基因與鯉的同源性最高,為87%;草魚Nrf2基因含有6個進(jìn)化過程中保守的Neh[Nrf2-Epoxy chloropropane(ECH)homology]區(qū)。實時定量PCR(q RT-PCR)和蛋白印跡法(Western blot)檢測結(jié)果表明,Nrf2基因在檢測的草魚8個組織中均有表達(dá)。Nrf2激活劑叔丁基對苯二酚(t BHQ)處理草魚腎細(xì)胞(CIK)后,CIK細(xì)胞總抗氧化能力顯著上調(diào),產(chǎn)生的活性氧下調(diào),Nrf2及其下游的HO-1和GST基因的m RNA表達(dá)上調(diào)。Western blot和免疫熒光(IF)檢測結(jié)果表明,t BHQ處理CIK后,Nrf2的蛋白表達(dá)也上調(diào),并伴隨著入細(xì)胞核現(xiàn)象。研究表明,保守的草魚Nrf2基因在機體中廣泛表達(dá),能通過上調(diào)自身及其下游抗氧化基因的表達(dá)下調(diào)細(xì)胞活性氧的產(chǎn)生,從而參與調(diào)控呼吸爆發(fā)過程。
[Abstract]:A large amount of reactive oxygen species can be produced during respiratory burst, in which nuclear factor E2 related factor 2nrf2 plays an important role. The Nrf2 gene of grass carp was cloned and analyzed, then the polyclonal antibody of Nrf2 protein was prepared, and the relationship between the polyclonal antibody and respiratory burst was studied. The cDNA length of grass carp Nrf2 gene is 1994 BP, and the open reading frame is 1782 BP, encoding 593 amino acids. Amino acid sequence alignment showed that the Nrf2 gene of grass carp had the highest homology with common carp (87%), and the Nrf2 gene of grass carp contained six conserved Neh [Nrf2-Epoxy chloropropane(ECH)homology] regions during evolution. The results of real-time quantitative PCR(q RT-PCR and Western blotanalysis showed that the total antioxidant activity of Nrf2 gene in 8 tissues of grass carp was significantly increased after treated with tert-Nrf2 activator, tert Ding Ji hydroquinone (t BHQ). The positive oxygen species (Ros) down-regulated the m RNA expression of nrf2 and its downstream HO-1 and GST genes. Western blot and immunofluorescence assays showed that the protein expression of nrf2 was also up-regulated after CIK treatment with t BHQ, and accompanied by the phenomenon of nuclear entry. The study shows that the conserved grass carp Nrf2 gene is widely expressed in the body and can regulate the respiratory burst by up-regulating the expression of antioxidant genes and down-regulating the production of reactive oxygen species (Ros).
【作者單位】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院淡水水產(chǎn)健康養(yǎng)殖湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心池塘健康養(yǎng)殖湖北省工程實驗室農(nóng)業(yè)部淡水生物繁育重點實驗室;仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動物科技學(xué)院廣州市水產(chǎn)病害與水禽養(yǎng)殖重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31502199,31572657,31372563) 廣東省海洋與漁業(yè)局基金(A201512C003,2015-115) 湖北省科技支撐計劃(2015BBA228,YSF2015000255) 武漢市科技局資助課題(2016020101010089) 中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項(2014PY035)~~
【分類號】：Q78;S917.4

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本文編號：1917152