發(fā)布時間：2018-05-18 10:19

  本文選題：發(fā)熱伴出疹 + 多重PCR　； 參考：《軍事醫(yī)學》2017年02期

【摘要】：目的建立一種能同時、快速、準確地檢測包括:麻疹病毒、風疹病毒、腸道病毒71型、水痘帶狀皰疹病毒、登革熱病毒、人類小DNA病毒B19、柯薩奇病毒A16型、A組β型釀膿鏈球菌(溶血性鏈球菌)、傷寒沙門菌,9種發(fā)熱伴出疹病原體的化學發(fā)光基因芯片的方法。方法根據9種病原體特異基因中的高度保守區(qū)序列設計引物與探針,進行多重不對稱PCR擴增,將帶有標記的擴增產物與帶有特異性探針的芯片雜交,經洗滌、化學發(fā)光顯色后進行結果分析。經多重PCR體系、雜交反應和化學發(fā)光檢測條件的優(yōu)化,評價該芯片的特異性、靈敏度和重復性。實時熒光PCR法與芯片法分別檢測腸道病毒EV71梯度稀釋的核酸,比較兩種方法的靈敏度。結果共篩選出9對特異性擴增引物和11條特異性檢測探針。該芯片具有良好的特異性、靈敏度和重復性。質粒參考品和體外轉錄RNA參考品的最低檢測限為3×10~3拷貝/反應,芯片法的靈敏度為實時熒光PCR法的1/10。檢測74例臨床樣本的靈敏度為95%,特異性為85.7%,總符合率為93.2%。結論建立了一種可同時檢測9種發(fā)熱伴出疹病原體的化學發(fā)光基因芯片的檢測方法,為發(fā)熱伴出疹的臨床診斷和流行病學調查提供了一種高通量的篩查手段。
[Abstract]:Objective to establish a method for simultaneous, rapid and accurate detection of measles virus, rubella virus, enterovirus 71, varicella zoster virus and dengue virus. Methods of chemiluminescent gene microarray for human small DNA virus B19, Coxsackievirus A16 A group 尾 -Streptococcus pyogenes (Streptococcus haemolyticus, Salmonella typhimurium, 9 kinds of febrile pathogens with rash). Methods primers and probes were designed according to the highly conserved region sequences of 9 pathogen specific genes and amplified by multiple asymmetric PCR. The labeled products were hybridized with microarray with specific probes. The results were analyzed after chemiluminescence. The specificity, sensitivity and repeatability of the chip were evaluated by optimization of multiple PCR system, hybridization reaction and chemiluminescence detection conditions. The sensitivity of the two methods was compared by real-time fluorescence PCR method and chip method for detecting the gradient dilution nucleic acid of enterovirus EV71. Results A total of 9 pairs of specific amplified primers and 11 specific detection probes were screened. The chip has good specificity, sensitivity and repeatability. The minimum detection limit of plasmid reference and in vitro transcription RNA reference was 3 脳 10 ~ 3 copies / reaction. The sensitivity of chip assay was 1 / 10 of that of real-time fluorescent PCR method. The sensitivity and specificity of 74 clinical samples were 95 and 85.7 respectively. The total coincidence rate was 93.2%. Conclusion A chemiluminescence gene chip method for simultaneous detection of 9 fever and rash pathogens was established, which provides a high-throughput screening method for clinical diagnosis and epidemiological investigation of fever with rash.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學;軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所;浙江省疾病預防控制中心;
【基金】：國家科技重大專項傳染病應急處置檢測技術平臺資助項目(2011ZX10004-001)
【分類號】：R440;R511

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7 謝松e，

本文編號：1905459