本文選題：矮化蓖麻 + GA20-氧化酶基因　； 參考：《天津科技大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)經(jīng)濟的發(fā)展,蓖麻種植產(chǎn)業(yè)已具有向種植矮化品種栽培方式發(fā)展的趨勢。矮化后的蓖麻具有在同等條件下比高稈蓖麻更強的節(jié)水、抗旱、抗倒伏、利于實現(xiàn)機械化收割等優(yōu)勢,因此,蓖麻矮化育種已成為蓖麻育種的熱點之一。在植物生長發(fā)育過程中,植物激素赤霉素(GA)參與莖稈節(jié)間的發(fā)育過程,從而影響植株的高度。赤霉素20氧化酶(GA20-oxidase)是植物赤霉素生物合成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶,決定具有生物活性GAs的合成量。本文克隆并初步研究了蓖麻中的GA-20氧化酶基因,為蓖麻矮化育種提供參考。本研究利用同源基因克隆法,克隆了 NCBI數(shù)據(jù)庫已公布的蓖麻GA-20氧化酶基因的堿基序列(XM_002510827.1),通過生物信息學(xué)軟件對其基因序列進行分析,表明克隆得到的是目的基因,記為RcGA20-ox。利用RT-PCR技術(shù),分析了 GA20-氧化酶基因在蓖麻不同器官的表達量,表明RcGA20-ox基因在蓖麻種子和嫩葉中表達量最高。利用RT-qPCR技術(shù),對RcGA20-ox基因在典型的"蓖綠2號"、"稼祥2號"、"CSR24.181"、"浙蓖17號"四種高稈和"中北4號"、"中北5號"、"天蓖26號"、"浙蓖36號"四種矮稈蓖麻品種不同時期嫩葉中的表達情況進行了分析,表明RcGA20-ox基因的表達差異,是影響植株表現(xiàn)高矮的重要原因之一。以蓖麻的cDNA和中間載體pHANNIBAL為模板,分別擴增得到正向片段、反向片段、內(nèi)含子片段,分別記為GA20s、GA20a、Intron。使用XbaⅠ和SacⅠ酶切載體pBI121,利用In-Fusion技術(shù),將線性載體與三個PCR片段進行連接,構(gòu)建了 RNA干擾載體pBI-GA20ox-RNAi。利用DNA凍融法,將干擾載體pBI-GA20ox-RNAi轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105中,成功制備了用于侵染的農(nóng)桿菌工程菌液。對蓖麻高效再生體系的重要步驟進行了優(yōu)化,采用分子水平評價機制,以LECl基因的表達與再生體系實際出芽效率作為評價指標(biāo),確定了不定芽最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+0.5mg/L6-BA+0.2mg/LIBA;研究GA3濃度對不定芽伸長的影響,確定了不定芽最適伸長培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA+0.1mg/L GA3。通過以上條件優(yōu)化,誘導(dǎo)生根后發(fā)育成完整的蓖麻植株并移栽成活。應(yīng)用自主構(gòu)建的蓖麻遺傳轉(zhuǎn)化體系,利用真空輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法,使用攜帶RNA干擾載體的農(nóng)桿菌對蓖麻胚尖進行侵染,篩選得到抗性植株16個,其概率為3.05%。通過PCR檢測,得到蓖麻轉(zhuǎn)基因植株5個,轉(zhuǎn)化率為0.95%。通過RT-qPCR技術(shù),初步驗證了各轉(zhuǎn)化植株的GA20-ox基因均不同程度受到抑制。
[Abstract]:With the development of modern agriculture economy , the castor planting industry has the tendency to develop the dwarf variety cultivation mode . The dwarf castor has the advantages of stronger water saving , drought resistance , lodging resistance and mechanical harvesting . The results showed that the optimal medium for adventitious buds was MS medium supplemented with 0.5 mg / L 6 - BA + 0.2 mg / L IBA + 0.1 mg / L GA 3 . The optimum medium was MS medium supplemented with 0.5 mg / L 6 - BA + 0.2 mg / L IBA + 0.1 mg / L GA 3 .

【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S565.6;Q943.2

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本文編號：1896201