本文選題：矮化蓖麻 + GA20-氧化酶基因��； 參考：《天津科技大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,蓖麻種植產(chǎn)業(yè)已具有向種植矮化品種栽培方式發(fā)展的趨勢(shì)。矮化后的蓖麻具有在同等條件下比高稈蓖麻更強(qiáng)的節(jié)水、抗旱、抗倒伏、利于實(shí)現(xiàn)機(jī)械化收割等優(yōu)勢(shì),因此,蓖麻矮化育種已成為蓖麻育種的熱點(diǎn)之一。在植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中,植物激素赤霉素(GA)參與莖稈節(jié)間的發(fā)育過(guò)程,從而影響植株的高度。赤霉素20氧化酶(GA20-oxidase)是植物赤霉素生物合成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶,決定具有生物活性GAs的合成量。本文克隆并初步研究了蓖麻中的GA-20氧化酶基因,為蓖麻矮化育種提供參考。本研究利用同源基因克隆法,克隆了 NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)已公布的蓖麻GA-20氧化酶基因的堿基序列(XM_002510827.1),通過(guò)生物信息學(xué)軟件對(duì)其基因序列進(jìn)行分析,表明克隆得到的是目的基因,記為RcGA20-ox。利用RT-PCR技術(shù),分析了 GA20-氧化酶基因在蓖麻不同器官的表達(dá)量,表明RcGA20-ox基因在蓖麻種子和嫩葉中表達(dá)量最高。利用RT-qPCR技術(shù),對(duì)RcGA20-ox基因在典型的"蓖綠2號(hào)"、"稼祥2號(hào)"、"CSR24.181"、"浙蓖17號(hào)"四種高稈和"中北4號(hào)"、"中北5號(hào)"、"天蓖26號(hào)"、"浙蓖36號(hào)"四種矮稈蓖麻品種不同時(shí)期嫩葉中的表達(dá)情況進(jìn)行了分析,表明RcGA20-ox基因的表達(dá)差異,是影響植株表現(xiàn)高矮的重要原因之一。以蓖麻的cDNA和中間載體pHANNIBAL為模板,分別擴(kuò)增得到正向片段、反向片段、內(nèi)含子片段,分別記為GA20s、GA20a、Intron。使用XbaⅠ和SacⅠ酶切載體pBI121,利用In-Fusion技術(shù),將線性載體與三個(gè)PCR片段進(jìn)行連接,構(gòu)建了 RNA干擾載體pBI-GA20ox-RNAi。利用DNA凍融法,將干擾載體pBI-GA20ox-RNAi轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105中,成功制備了用于侵染的農(nóng)桿菌工程菌液。對(duì)蓖麻高效再生體系的重要步驟進(jìn)行了優(yōu)化,采用分子水平評(píng)價(jià)機(jī)制,以LECl基因的表達(dá)與再生體系實(shí)際出芽效率作為評(píng)價(jià)指標(biāo),確定了不定芽最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+0.5mg/L6-BA+0.2mg/LIBA;研究GA3濃度對(duì)不定芽伸長(zhǎng)的影響,確定了不定芽最適伸長(zhǎng)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA+0.1mg/L GA3。通過(guò)以上條件優(yōu)化,誘導(dǎo)生根后發(fā)育成完整的蓖麻植株并移栽成活。應(yīng)用自主構(gòu)建的蓖麻遺傳轉(zhuǎn)化體系,利用真空輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法,使用攜帶RNA干擾載體的農(nóng)桿菌對(duì)蓖麻胚尖進(jìn)行侵染,篩選得到抗性植株16個(gè),其概率為3.05%。通過(guò)PCR檢測(cè),得到蓖麻轉(zhuǎn)基因植株5個(gè),轉(zhuǎn)化率為0.95%。通過(guò)RT-qPCR技術(shù),初步驗(yàn)證了各轉(zhuǎn)化植株的GA20-ox基因均不同程度受到抑制。
[Abstract]:With the development of modern agriculture economy , the castor planting industry has the tendency to develop the dwarf variety cultivation mode . The dwarf castor has the advantages of stronger water saving , drought resistance , lodging resistance and mechanical harvesting . The results showed that the optimal medium for adventitious buds was MS medium supplemented with 0.5 mg / L 6 - BA + 0.2 mg / L IBA + 0.1 mg / L GA 3 . The optimum medium was MS medium supplemented with 0.5 mg / L 6 - BA + 0.2 mg / L IBA + 0.1 mg / L GA 3 .

【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S565.6;Q943.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉文博;張小榮;曹永忠;吳艷濤;焦新安;劉秀梵;;非抗性RNAi載體及沙門(mén)氏菌遞送系統(tǒng)的構(gòu)建[J];揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào);2006年01期

2 趙峰玉;鄭銀英;張瑜;喬亞紅;崔百明;向本春;;抗番茄花葉病毒RNAi載體的構(gòu)建及煙草遺傳轉(zhuǎn)化[J];石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年02期

3 馬立安;張忠明;;擬南芥Ran2基因超表達(dá)和RNAi載體的構(gòu)建[J];長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)農(nóng)學(xué)卷;2007年02期

4 榮光;王新華;薄新文;連宏軍;鐘發(fā)剛;鄧宇;陳琛;夏倫斌;郭燕;王運(yùn)宏;;捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)Hc38基因的克隆及其RNAi載體的構(gòu)建[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年01期

5 張瑩瑩;李朝;楊志新;許龍;朱恒奇;周曉巍;黃培堂;;應(yīng)用H1-U6雙啟動(dòng)子RNAi載體篩選人泛素結(jié)合酶hUBE2W的RNAi有效靶點(diǎn)[J];生物工程學(xué)報(bào);2008年11期

6 鄭寒;陳燁;陳靜;馬建華;劉燕;付體華;;HvABA8′OH-1基因RNAi載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化[J];應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào);2010年01期

7 張凌云;鄧贊;安靜;;柑橘CsPRP4基因RNAi載體的構(gòu)建[J];貴州師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年01期

8 朱煒;魏建民;烏日罕;;擬南芥Ca~(2+)泵基因ACA_2的RNAi載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因植株的篩選[J];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年04期

9 李曉明;高朝寶;彭明;崔百明;;棉蚜Catb5基因RNAi載體的構(gòu)建及其對(duì)煙草的轉(zhuǎn)化[J];生物技術(shù)通報(bào);2010年08期

10 彭琦;張?jiān)?雙桑;魏然;伍林濤;丁昕;阮穎;劉春林;;甘藍(lán)型油菜Fad2與Fae1基因雙干擾RNAi載體的構(gòu)建[J];生物技術(shù)通報(bào);2007年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前6條

1 孫朕;樊寶良;;有效避免干擾素反應(yīng)的RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)長(zhǎng)dsRNA的RNAi載體的設(shè)計(jì)、構(gòu)建及初步驗(yàn)證[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物繁殖學(xué)分會(huì)第十五屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2010年

2 王靜;龔萍;馬驍;龔炎長(zhǎng);彭秀麗;俸艷萍;李世軍;;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的雞Foxl2基因RNAi載體的構(gòu)建[A];安全優(yōu)質(zhì)的家禽生產(chǎn)——第十五次全國(guó)家禽學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2011年

3 邱楓;高洪文;許雷;;基于檸條pal基因的RNAi載體構(gòu)建、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因植株檢測(cè)的研究[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)農(nóng)業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

4 斯欽巴特爾;張輝;哈斯阿古拉;賈霄云;李強(qiáng);高鳳云;;亞麻雄性不育相關(guān)基因的克隆及RNAi載體構(gòu)建[A];東北三省及內(nèi)蒙古地區(qū)遺傳學(xué)研究進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

5 于丹;金春順;楊景樸;劉巖;文連姬;趙胤;;新型RNAi載體的構(gòu)建及其對(duì)喉癌干細(xì)胞增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡的研究[A];吉林省醫(yī)學(xué)會(huì)第九次耳鼻咽喉—頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

6 林杉;田占偉;古麗汗·阿不都熱木;陳寶麒;張文祥;趙宗勝;;綿羊顆粒細(xì)胞抑制素βA基因RNAi載體的構(gòu)建[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)養(yǎng)羊?qū)W分會(huì)2014年全國(guó)養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會(huì)議論文集[C];2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王元英;煙草抗病基因篩選及其高通量RNAi載體庫(kù)的構(gòu)建[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 賈啟濤;水牛抑制素α亞基基因（INHA）RNAi載體干擾效果分析及其轉(zhuǎn)基因小鼠模型的構(gòu)建[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

2 耿文超;棉葉螨TtAK與TtCHI雙價(jià)RNAi載體的構(gòu)建及抗蟲(chóng)性初步研究[D];石河子大學(xué);2016年

3 康駿璞;交換形成相關(guān)基因的RNAi載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 謝麗娟;煙草orf25、atp9基因的RNAi載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化[D];江西農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 翟雨佳;蓖麻GA20-ox基因表達(dá)分析及RNAi載體轉(zhuǎn)化的初步研究[D];天津科技大學(xué);2016年

6 樊紹剛;黑麥草重結(jié)晶抑制蛋白基因家族的克隆及其RNAi載體的構(gòu)建[D];中南林業(yè)科技大學(xué);2010年

7 郭文靜;水稻osvdac基因RNAi載體的構(gòu)建及其在轉(zhuǎn)基因植株中的表達(dá)分析[D];中南民族大學(xué);2013年

8 劉媛;以sbe A和B為靶標(biāo)的RNAi載體構(gòu)建及對(duì)馬鈴薯的轉(zhuǎn)化[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

9 王欣茹;褐飛虱精氨酸激酶基因的克隆及其RNAi載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)化[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

10 黃志鵬;紅麻CMS系和保持系能量代謝相關(guān)基因的克隆、表達(dá)及RNAi載體構(gòu)建[D];廣西大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：1896201