發(fā)布時間：2018-05-14 10:26

  本文選題：輪狀病毒 + VP�。� 參考：《黑龍江畜牧獸醫(yī)》2017年09期

【摘要】：為了研究開發(fā)植物來源的輪狀病毒疫苗,試驗采用模式植物擬南芥作為生物反應器,將輪狀病毒主要中和抗原基因VP7通過農(nóng)桿菌介導法轉化野生型擬南芥,獲得了含有VP7的轉基因擬南芥穩(wěn)定株系,并分析其種子表達蛋白的免疫原性。首先根據(jù)擬南芥密碼子的偏好性,設計合成優(yōu)化的VP7基因,構建植物表達載體p PHAP1301-His-HRVVP7;然后通過農(nóng)桿菌介導的Floral Dip法轉化擬南芥,收獲T0代種子后播種,噴用草銨膦篩選轉基因擬南芥獲得T1代種子,重復上述過程最終獲得T3代擬南芥種子,通過RT-PCR、Western、ELISA法等進行分析。結果表明:VP7基因已成功整合到擬南芥的基因組并進行了轉錄和蛋白表達,并且VP7蛋白占總可溶性蛋白的0.31%,即每克轉基因擬南芥種子中所含目的蛋白為43.3μg。以轉基因擬南芥穩(wěn)定株系種子中的可溶性蛋白口服免疫小鼠,可使小鼠獲得免疫原性。說明通過植物作為生物反應器生產(chǎn)輪狀病毒疫苗方法可行。
[Abstract]:In order to develop a rotavirus vaccine from plants, the model plant Arabidopsis thaliana was used as a bioreactor. The VP7 gene of rotavirus neutralizing antigen was transformed into wild type Arabidopsis thaliana by Agrobacterium tumefaciens. The transgenic Arabidopsis thaliana stable strain containing VP7 was obtained and the immunogenicity of the expressed protein was analyzed. According to the preference of codon in Arabidopsis thaliana, the optimized VP7 gene was designed and synthesized, and the plant expression vector pPHAP1301-His-HRVVP7 was constructed, then transformed Arabidopsis thaliana into Arabidopsis thaliana by Floral Dip mediated by Agrobacterium tumefaciens, the seeds of T0 generation were harvested and seeded. T1 generation seeds of transgenic Arabidopsis thaliana were screened by spraying ammonium phosphate, and T3 generation seeds were obtained by repeating the above process. The results were analyzed by RT-PCR- Western Elisa. The results showed that the 1: VP7 gene had been successfully integrated into the genome of Arabidopsis thaliana for transcription and protein expression, and the VP7 protein accounted for 0.31% of the total soluble protein, that is, 43.3 渭 g of the target protein per gram of transgenic Arabidopsis thaliana seeds. Mice were immunized orally with soluble protein in stable strain seeds of transgenic Arabidopsis thaliana. The results showed that it was feasible to produce rotavirus vaccine by using plant as bioreactor.
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學教育部生物反應器與藥物開發(fā)工程研究中心;吉林農(nóng)業(yè)科技學院中藥學院;吉林農(nóng)業(yè)大學中藥材學院;溫州大學;
【基金】：“863”國家高技術研究發(fā)展計劃項目“油體生物反應器研制及產(chǎn)品開發(fā)”(2011AA100606)
【分類號】：S859.797

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