本文選題：輪狀病毒 + VP　； 參考：《黑龍江畜牧獸醫(yī)》2017年09期

【摘要】：為了研究開發(fā)植物來源的輪狀病毒疫苗,試驗(yàn)采用模式植物擬南芥作為生物反應(yīng)器,將輪狀病毒主要中和抗原基因VP7通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化野生型擬南芥,獲得了含有VP7的轉(zhuǎn)基因擬南芥穩(wěn)定株系,并分析其種子表達(dá)蛋白的免疫原性。首先根據(jù)擬南芥密碼子的偏好性,設(shè)計(jì)合成優(yōu)化的VP7基因,構(gòu)建植物表達(dá)載體p PHAP1301-His-HRVVP7;然后通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Floral Dip法轉(zhuǎn)化擬南芥,收獲T0代種子后播種,噴用草銨膦篩選轉(zhuǎn)基因擬南芥獲得T1代種子,重復(fù)上述過程最終獲得T3代擬南芥種子,通過RT-PCR、Western、ELISA法等進(jìn)行分析。結(jié)果表明:VP7基因已成功整合到擬南芥的基因組并進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá),并且VP7蛋白占總可溶性蛋白的0.31%,即每克轉(zhuǎn)基因擬南芥種子中所含目的蛋白為43.3μg。以轉(zhuǎn)基因擬南芥穩(wěn)定株系種子中的可溶性蛋白口服免疫小鼠,可使小鼠獲得免疫原性。說明通過植物作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)輪狀病毒疫苗方法可行。
[Abstract]:In order to develop a rotavirus vaccine from plants, the model plant Arabidopsis thaliana was used as a bioreactor. The VP7 gene of rotavirus neutralizing antigen was transformed into wild type Arabidopsis thaliana by Agrobacterium tumefaciens. The transgenic Arabidopsis thaliana stable strain containing VP7 was obtained and the immunogenicity of the expressed protein was analyzed. According to the preference of codon in Arabidopsis thaliana, the optimized VP7 gene was designed and synthesized, and the plant expression vector pPHAP1301-His-HRVVP7 was constructed, then transformed Arabidopsis thaliana into Arabidopsis thaliana by Floral Dip mediated by Agrobacterium tumefaciens, the seeds of T0 generation were harvested and seeded. T1 generation seeds of transgenic Arabidopsis thaliana were screened by spraying ammonium phosphate, and T3 generation seeds were obtained by repeating the above process. The results were analyzed by RT-PCR- Western Elisa. The results showed that the 1: VP7 gene had been successfully integrated into the genome of Arabidopsis thaliana for transcription and protein expression, and the VP7 protein accounted for 0.31% of the total soluble protein, that is, 43.3 渭 g of the target protein per gram of transgenic Arabidopsis thaliana seeds. Mice were immunized orally with soluble protein in stable strain seeds of transgenic Arabidopsis thaliana. The results showed that it was feasible to produce rotavirus vaccine by using plant as bioreactor.
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)教育部生物反應(yīng)器與藥物開發(fā)工程研究中心;吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥學(xué)院;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院;溫州大學(xué);
【基金】：“863”國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目“油體生物反應(yīng)器研制及產(chǎn)品開發(fā)”(2011AA100606)
【分類號】：S859.797

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本文編號：1887494