本文選題：前列腺癌 + 胰腺癌��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：目的基于實(shí)時(shí)細(xì)胞分析的技術(shù)發(fā)展,探索一種更加簡(jiǎn)便穩(wěn)定的方法評(píng)估不同腫瘤細(xì)胞系對(duì)藥物的敏感性,為前列腺癌和胰腺癌的臨床治療選擇藥物提供參考。方法選取VCaP、DU145、PC-3、PC-3M-2B4和PC-3M-IE8五株人前列腺癌細(xì)胞系,和SW1900、Capan-2、PANC-1三株人胰腺癌細(xì)胞系,選用多西他賽、卡巴他賽和醋酸阿比特龍三種前列腺癌常用治療藥物,及鹽酸吉西他濱和替吉奧膠囊兩種胰腺癌常用治療藥物,細(xì)胞接種24小時(shí)后分別梯度濃度給藥,利用RTCA監(jiān)測(cè)給藥前后的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,計(jì)算藥物對(duì)前列腺癌細(xì)胞和胰腺癌細(xì)胞的半抑制濃度(IC50)。對(duì)胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)給藥,利用AO/EB染色和激光共聚焦觀察,驗(yàn)證鹽酸吉西他濱和替吉奧膠囊所得IC50值。結(jié)果多西他賽對(duì) VCaP、DU145、PC-3、PC-3M-2B4、PC-3M-IE8 五種細(xì)胞系 24h的 IC50 分別為 8.81 nM、11.61 nM、1.78 nM、1.44 nM、8.69 nM�？ò退悓�(duì)五種細(xì)胞系 24 h 的 IC50 分別為 3.73 nM、3.96 nM、10.41 nM、5.43 nM、7.37 nM。醋酸阿比特龍對(duì)五種細(xì)胞系24小時(shí)的IC50分別為8.34μM、8.60 μM、24.20 μM、8.59 μM、13.21 μM。鹽酸吉西他濱對(duì)SW1900、Cpan-2、PANC-1三種細(xì)胞系72h的IC50 分別為 1.69μmol/L、10.05μmol/L、12.74μmol/L。替吉奧膠囊對(duì)三種細(xì)胞系 72h的 IC50 分別為 180.29μmol/L、765.70μmol/L、95.57μmol/L。AO/EB 染色驗(yàn)證 IC50真實(shí)可靠。結(jié)論P(yáng)C-3M-2B4及DU145可作為多西他賽的對(duì)照;VCaP及PC-3可作為卡巴他賽與醋酸阿比特龍的對(duì)照,SW1990及Capan-2可作為鹽酸吉西他濱與替吉奧膠囊的對(duì)照,建立細(xì)胞模型,進(jìn)行藥物體外敏感性篩選,為臨床應(yīng)用提供參考。目的:為了驗(yàn)證Trim46低表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞Capan-2增殖能力及遷移能力的影響,觀察Trim46在Capan-2細(xì)胞內(nèi)表達(dá)位置、與腫瘤遷移相關(guān)蛋白的定位關(guān)系及對(duì)其表達(dá)水平的影響。方法:利用miRNA沉默建立Trim46低表達(dá)Capan-2細(xì)胞。使用Western blot及細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)Trim46在Capan-2細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平,確認(rèn)Trim46低表達(dá)Capan-2細(xì)胞系的建立;利用免疫熒光檢測(cè)Trim46在Capan-2細(xì)胞內(nèi)與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的共定位情況;利用Western blot檢測(cè)Trim46低表達(dá)對(duì)Capan-2細(xì)胞中相關(guān)腫瘤轉(zhuǎn)移蛋白表達(dá)水平的影響;利用RTCA檢測(cè)Trim46低表達(dá)對(duì)Capan-2細(xì)胞增殖能力的影響;利用愈傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Trim46低表達(dá)對(duì)Capan-2細(xì)胞遷移能力的影響。結(jié)果:建立了 Trim46低表達(dá)Capan-2細(xì)胞系;Trim46主要在Capan-2的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜處表達(dá),呈點(diǎn)狀或絲狀結(jié)構(gòu);Trim46與actin、fak、及integrinbeta2、integrin beta6共定位較好;Trim46低表達(dá)會(huì)影響細(xì)胞黏附轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的表達(dá),FAK總蛋白表達(dá)下調(diào)、phoshph-FAKpTyr861表達(dá)上調(diào)、Cortactin(皮層肌動(dòng)蛋白)表達(dá)下調(diào)、ARP2(肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白)表達(dá)上調(diào)、CrKL表達(dá)上調(diào);Trim46低表達(dá)能抑制Capan-2細(xì)胞的增殖及遷移能力。結(jié)論:Trim46基因可能與腫瘤增殖與遷移能力有關(guān)。
[Abstract]:Objective to explore a more convenient and stable method to evaluate the drug sensitivity of different tumor cell lines based on the development of real-time cell analysis, and to provide a reference for the clinical treatment of prostate cancer and pancreatic cancer. Methods five PC-3M-2B4 and PC-3M-IE8 human prostate cancer cell lines, and three human pancreatic cancer cell lines SW1900 Capan-2PANC-1 were selected. Three commonly used prostatic cancer drugs, docetaxel, carbatin and abbitrone acetate, were used to treat prostate cancer. And gemcitabine hydrochloride and tigeo capsule were commonly used in the treatment of pancreatic cancer. After 24 hours of cell inoculation, the cell growth curve was monitored by RTCA. The semi-inhibitory concentration of the drug on prostate cancer cells and pancreatic cancer cells was calculated. AO/EB staining and laser confocal observation were used to verify the IC50 values of gemcitabine hydrochloride and tigueo capsules for intraplate administration of pancreatic cancer cells. Results the IC50 of docetaxel on five PC-3M-2B4 PC-3M-3M-IE8 cell lines was 8.81nM 11.61nM 1.78nM, 1.44nM, 8.69 nMfor 24 h, respectively. The IC50 of Carbataxel on five cell lines for 24 h was 3.73 nMN 3.96 nMU 10.41 nMN 5.43 nMN 7.37 nM. respectively. The IC50 of the five cell lines was 8.34 渭 M, 8.60 渭 M, 24.20 渭 M, 8.59 渭 M, and 13.21 渭 m, respectively. The IC50 of gemcitabine hydrochloride was 1.69 渭 mol / L ~ 10.05 渭 mol 路L ~ (-1) and 12.74 渭 mol / L 路L ~ (-1) for 72 h, respectively. The IC50 of Tigeo capsule was 180.29 渭 mol / L 765.70 渭 mol / L 95.57 渭 mol/L.AO/EB for 72 h, respectively, to verify the authenticity of IC50. Conclusion PC-3M-2B4 and DU145 can be used as control group of docetaxel, VCaP and PC-3 can be used as control of carbataxel and abbibilone acetate. SW1990 and Capan-2 can be used as control of gemcitabine hydrochloride and tigueo capsule to establish cell model and screen drug sensitivity in vitro. To provide reference for clinical application. Aim: to investigate the effect of low expression of Trim46 on the proliferation and migration of Capan-2 in pancreatic cancer cells, and to observe the location of Trim46 expression in Capan-2 cells and its relationship with the localization of tumor migration-associated protein and its effect on the expression level of Trim46. Methods: Trim46 low expression Capan-2 cells were established by miRNA silencing. Western blot and cellular immunofluorescence were used to detect the expression of Trim46 in Capan-2 cells, to confirm the establishment of Capan-2 cell line with low expression of Trim46, and to detect the co-localization of Trim46 in Capan-2 cells associated with tumor metastasis. Western blot was used to detect the effect of low expression of Trim46 on the expression of tumor metastasis protein in Capan-2 cells, RTCA was used to detect the effect of low expression of Trim46 on the proliferation of Capan-2 cells, and callus assay was used to detect the effect of low expression of Trim46 on the migration ability of Capan-2 cells. Results: trim46, a Capan-2 cell line with low expression of Trim46, was mainly expressed in the cytoplasm and cell membrane of Capan-2. The low expression of trim46 and integrin beta6 may affect the expression of cell adhesion and metastasis related protein. The expression of total FAK protein down-regulates the expression of Cortactin (cortical actin) and down-regulates ARP2( actin phase of actin phase). The low expression of Trim46 could inhibit the proliferation and migration of Capan-2 cells. Conclusion\% Trim46 gene may be related to tumor proliferation and migration ability.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.9;R737.25

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本文編號(hào)：1882622