發(fā)布時間：2018-05-11 22:43

  本文選題：羊傳染性膿皰病毒 + CEV基因��； 參考：《動物醫(yī)學(xué)進展》2017年03期

【摘要】：為了克隆羊傳染性膿皰病毒CEV112基因并對其進行原核表達,根據(jù)GenBank中CEV112基因序列信息設(shè)計1對引物,以CEV基因組為模板,采用PCR擴增出1條大小為867bp的CEV112基因,將其連接到pMD20-T載體上,構(gòu)建pMD20-T-CEV112重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌(E.coli)DH5α感受態(tài)細胞中,提取質(zhì)粒進行酶切鑒定。鑒定正確后構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-CEV112,轉(zhuǎn)化到E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細胞中。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達,表達產(chǎn)物用SDS-PAGE和Western blot進行分析。結(jié)果表明,成功構(gòu)建了pET-28a-CEV112原核表達載體,并在E.coli BL21(DE3)中表達了CEV112基因,表達的融合蛋白大小約36ku,且主要以包涵體形式存在,為后續(xù)開展CEV112基因的功能研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to express the CEV112 gene of sheep infectious pustule virus, a pair of primers were designed according to the sequence information of CEV112 gene in GenBank. A CEV112 gene of 867bp was amplified by PCR using CEV genome as template. The recombinant plasmid of pMD20-T-CEV112 was constructed by ligation into pMD20-T vector and transformed into E. coli DH5 偽 competent cells. The plasmid was extracted and identified by restriction endonuclease digestion. After identification, the recombinant plasmid pET28a-CEV112 was constructed and transformed into E.coli BL21 (DE3) competent cells. The expression was induced by IPTG, and the expression product was analyzed by SDS-PAGE and Western blot. The results showed that the prokaryotic expression vector of pET-28a-CEV112 was successfully constructed, and the CEV112 gene was expressed in E.coli BL21DE3. The fusion protein was about 36ku. the fusion protein mainly existed in the form of inclusion body, which laid a foundation for the further study of the function of CEV112 gene.
【作者單位】： 海南大學(xué)熱帶農(nóng)林學(xué)院海南省熱帶動物繁育與疫病研究重點實驗室�？谑袆游锘蚬こ讨攸c實驗室;
【基金】：海南省重大科技計劃項目(ZDKJ2016017-01)
【分類號】：S852.654

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