本文選題：獨(dú)行菜 + LaMK基因�。� 參考：《中國藥學(xué)雜志》2017年11期

【摘要】：目的克隆獨(dú)行菜強(qiáng)心苷生物合成途徑關(guān)鍵酶甲羥戊酸激酶(mevalonate kinase,MK)基因,進(jìn)行生物信息學(xué)分析,原核表達(dá)、純化和組織特異性分析。方法通過分析獨(dú)行菜轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),設(shè)計(jì)基因特異性引物,克隆了LaMK基因的cDNA序列,構(gòu)建p ET-32a-La MK原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)表達(dá)LaMK重組蛋白。結(jié)果 LaMK基因的開放閱讀框(opening reading frame,ORF)全長為1 137 bp,編碼379個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析顯示,La MK蛋白可能定位于細(xì)胞質(zhì)中,沒有跨膜區(qū)不含信號(hào)肽,含有GHMP激酶家族保守結(jié)構(gòu)域和ATP結(jié)合位點(diǎn)。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示,La MK蛋白與擬南芥等十字花科植物的MK蛋白同源性較高。在大腸桿菌BL21(DE3)菌株中成功表達(dá)La MK重組蛋白,利用Ni2+親和色譜得到了純化的La MK重組蛋白。熒光定量PCR結(jié)果表明,LaMK基因在花中表達(dá)量最高,葉和根中次之,莖中較低,在幼苗中表達(dá)量最低。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)為下一步制備La MK蛋白抗體,研究La MK基因在獨(dú)行菜強(qiáng)心苷生物合成途徑中的功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to clone the key enzyme mevalonate kinase- MK gene in the biosynthesis pathway of monocardioside, and analyze its bioinformatics, prokaryotic expression, purification and tissue specificity. Methods the cDNA sequence of LaMK gene was cloned by analyzing the transcriptome data of monolayer, and then the expression vector of p ET-32a-La MK was constructed to induce the expression of LaMK recombinant protein. Results the open reading reading frame ORF of LaMK gene was 1 137 BP, encoding 379 amino acids. Bioinformatics analysis showed that La MK protein may be located in the cytoplasm without signal peptide in transmembrane region, and contain conserved domain of GHMP kinase family and ATP binding site. Phylogenetic analysis showed that La MK protein had high homology with Arabidopsis and other cruciferous plants. The recombinant LaMK protein was successfully expressed in Escherichia coli BL21DE3 strain and purified by Ni2 affinity chromatography. The results of fluorescence quantitative PCR showed that LaMK gene expression was the highest in flower, followed by leaf and root, lower in stem and lowest in seedling. Conclusion this study lays a foundation for the preparation of La MK protein antibody and the study of the function of La MK gene in the biosynthesis pathway of monocardioside.
【作者單位】： 河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院;呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃“973計(jì)劃”項(xiàng)目(2013CB531802) 河南省科技攻關(guān)計(jì)劃(162102310468) 河南中醫(yī)學(xué)院博士科研基金(BSJJ2011-07)
【分類號(hào)】：Q943.2;S567.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫軍;;淺談原核表達(dá)的技巧[J];大學(xué)時(shí)代;2006年07期

2 金元昌;李景鵬;李會(huì)東;周建紅;;重組促性腺激素釋放激素基因原核表達(dá)的影響因素[J];湘潭師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年02期

3 韓鈺;王艷林;;小鼠精胺氧化酶的原核表達(dá)與鑒定[J];生物技術(shù)通訊;2007年01期

4 朱向前;楊靜;丁曉然;王升啟;;重組人磷脂爬行酶1的原核表達(dá)及純化[J];生物技術(shù)通訊;2011年06期

5 哲名家;張淼濤;云濤;王玢tx;劉光清;;兔巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆與原核表達(dá)[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年04期

6 謝海燕,郭霄峰;豬α-干擾素的原核表達(dá)[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年04期

7 孫東波;馮力;劉杰;時(shí)洪艷;佟有恩;劉勝旺;童光志;;豬傳染性胃腸炎病毒n基因的原核表達(dá)及重組蛋白的免疫活性分析[J];病毒學(xué)報(bào);2006年02期

8 孫軍;王俊杰;秦波;伏秀青;高倩倩;王興智;朱筱娟;;粘著斑激酶的原核表達(dá)、純化及抗體的制備[J];分子科學(xué)學(xué)報(bào);2007年02期

9 戴華;鄭佳玉;陳俊華;潘志明;焦新安;;雞α干擾素基因的原核表達(dá)及其活性測定[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2009年10期

10 湯承;張兆敏;岳華;;雞熱休克蛋白70基因的克隆及原核表達(dá)[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 馬文濤;閆若潛;吳志明;劉光輝;盛敏;謝彩華;;豬白細(xì)胞介素-6的原核表達(dá)及其生物學(xué)活性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會(huì)論文集(下冊)[C];2010年

2 丁夢蝶;魯?shù)?王紅寧;田浪;陽泰;張毅;樊汶樵;郭自成;;禽傳染性支氣管炎病毒多基因串聯(lián)表位抗原的原核表達(dá)研究[A];四川省動(dòng)物學(xué)會(huì)第九次會(huì)員代表大會(huì)暨第十屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

3 林海波;張桂紅;詹國英;廖明;任濤;羅開健;曹偉勝;徐成剛;辛朝安;;豬白細(xì)胞介素-6基因的非融合原核表達(dá)研究[A];第一屆中國養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會(huì)——2005中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

4 隋桂琴;左玲;王桂云;;人堿性成纖維細(xì)胞生長因子的原核表達(dá)[A];中國眼底病論壇·全國眼底病專題學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2008年

5 黃斯勇;梁英民;韓驊;李國輝;伍艷蘭;康志杰;何飛;張萍;徐恒;劉利;;人Detla-like4ext-93-217原核表達(dá)、純化及蛋白活性檢測[A];第12屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

6 張紅;劉志國;屈伸;;人源受體相關(guān)蛋白的原核表達(dá)優(yōu)化及功能檢測[A];湖北省暨武漢生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)和第十五次學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

7 袁志棟;王志亮;劉雨田;吳曉東;劉海生;;水貂朊蛋白前體基因的克隆與原核表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第六次研討會(huì)論文集[C];2005年

8 王士友;張耀洲;;一個(gè)新的家蠶基因的克隆、原核表達(dá)及純化[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

9 伍艷蘭;黃斯勇;牛曉麗;張麗;陳茹菲;何飛;張萍;梁英民;劉利;;人Delta-like4ext-93-217原核表達(dá)、純化及蛋白活性檢測[A];第12屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

10 馬文濤;閆若潛;吳志明;劉光輝;盛敏;謝彩華;;豬白細(xì)胞介素-6的原核表達(dá)及其生物學(xué)活性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 張曉鳴;人IL-16的原核表達(dá)與其功能的初步研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2000年

2 曹秀利;楊樹PtCDD基因的原核表達(dá)及酶活分析[D];南京林業(yè)大學(xué);2008年

3 黃新河;小鼠TAp63γ的原核表達(dá)、純化、結(jié)構(gòu)及功能初步研究[D];四川大學(xué);2007年

4 張大鵬;VP60蛋白的原核表達(dá)、抗體制備及VP60基因轉(zhuǎn)化的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

5 張少斌;豌豆肌動(dòng)蛋白異型體（PEAc1）的原核表達(dá)及其藻熒光探針的研制[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

6 尹國華;利用Red重組系統(tǒng)構(gòu)建dsRNA原核表達(dá)體系抗煙草花葉病毒的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 韓凌霞;豬圓環(huán)病毒2型基因的原核表達(dá)與單克隆抗體的制備及感染性分子克隆的動(dòng)物接種試驗(yàn)[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2003年

8 于揚(yáng);重組人源GPx4及其模擬物的原核表達(dá)、結(jié)構(gòu)與功能的研究[D];吉林大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 周鵬;結(jié)核分枝桿菌特異性蛋白的原核表達(dá)、純化及免疫原性分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 高小磊;六種結(jié)核分枝桿菌特異性抗原的原核表達(dá)及16 KD-38 KD和Ag85A血清學(xué)診斷效果的研究[D];蘭州大學(xué);2015年

3 彭傳林;家蠅抗真菌肽MAF-1原核表達(dá)體系優(yōu)化與活性分析[D];貴陽醫(yī)學(xué)院;2015年

4 鐘樹懷;豬囊尾蚴膜聯(lián)蛋白的原核表達(dá)及其免疫反應(yīng)性分析[D];貴陽醫(yī)學(xué)院;2015年

5 孫明潭;豬繁殖與呼吸綜合征病毒河北地方株ORF7基因的原核表達(dá)及ELISA方法的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 張良斌;天祝白牦牛KAP家族基因克隆、原核表達(dá)及其在皮膚中的表達(dá)分析[D];西北民族大學(xué);2015年

7 達(dá)小強(qiáng);牦牛轉(zhuǎn)鐵蛋白基因克隆與原核表達(dá)[D];西北民族大學(xué);2015年

8 高翠娥;飛蝗2個(gè)CYP450轉(zhuǎn)基因果蠅品系對殺蟲劑的敏感性及原核表達(dá)[D];山西大學(xué);2015年

9 吳雨航;布氏桿菌病間接ELISA方法的建立及吉林省梅花鹿主要養(yǎng)殖地區(qū)鹿布病血清學(xué)調(diào)查[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 姜旭;百合無癥病毒16kDα基因的克隆、原核表達(dá)及亞細(xì)胞定位[D];大連理工大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1853337