發(fā)布時(shí)間：2018-05-06 03:22

  本文選題：鴨疫里默氏桿菌 + 雙重PCR�。� 參考：《中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年01期

【摘要】：為了快速、準(zhǔn)確地鑒定鴨疫里默氏桿菌(RA),本實(shí)驗(yàn)根據(jù)RACH3株16SrRNA和dnaB基因序列設(shè)計(jì)引物,經(jīng)引物篩選和PCR反應(yīng)條件優(yōu)化后,建立了檢測(cè)RA的雙重PCR方法。結(jié)果表明該方法對(duì)檢測(cè)的所有不同血清型RA菌株均能擴(kuò)增出364bp和627bp兩條特異的目的片段,而對(duì)鴨致病性大腸桿菌、鴨源禽巴氏桿菌、腸炎沙門(mén)氏菌、黃桿菌等對(duì)照菌株的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性;該P(yáng)CR方法對(duì)細(xì)菌HXb2基因組DNA和菌液的檢測(cè)敏感性分別為17.33ng/mLDNA和2.9×10~3cfu/mL細(xì)菌。利用建立的雙重PCR檢測(cè)了RA感染鴨的肝臟和腦組織中的RA,結(jié)果顯示該方法與細(xì)菌分離法符合率分別為100%(9/9)和77.8%(7/9),表明本實(shí)驗(yàn)建立的雙重PCR方法可用于檢測(cè)肝臟組織中RA。本研究建立的雙重PCR方法既可以對(duì)分離的RA疑似菌株進(jìn)行快速檢測(cè)和鑒定,也可以直接用于臨床樣品中RA的檢測(cè)。
[Abstract]:In order to identify RIA quickly and accurately, a double PCR method for the detection of RA was established based on the sequence of 16SrRNA and dnaB genes of RACH3 strain. The primers were screened and the conditions of PCR reaction were optimized. The results showed that the method could amplify two specific target fragments of 364bp and 627bp to all the RA strains of different serotypes, but to duck pathogenic Escherichia coli, Pasteurella duckling, Salmonella enteritidis. The results of amplification of the control strains were negative, and the sensitivity of the PCR method to the detection of bacterial HXb2 genomic DNA and bacterial fluid was 17.33ng/mLDNA and 2.9 脳 10~3cfu/mL, respectively. The double PCR was used to detect RAA in liver and brain tissues of ducks infected with RA. The results showed that the coincidence rates of this method with bacterial isolation method were 100 / 9 and 77.8 / 7 / 9, respectively. The results showed that the double PCR method established in this experiment could be used to detect RAA in liver tissue. The dual PCR method developed in this study can be used for rapid detection and identification of suspected strains of RA in clinical samples as well as for the detection of RA in clinical samples.
【作者單位】： 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31272590、31472224)
【分類號(hào)】：S852.61

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