本文選題：marinacarboline + 甲基化��； 參考：《微生物學(xué)報(bào)》2017年07期

【摘要】：【目的】定位Marinactinospora thermotolerans SCSIO 00652基因組中負(fù)責(zé)marinacarbolines甲基化修飾的基因mcbD并鑒定其功能�！痉椒ā坑坞xM.thermotolerans SCSIO 00652的基因組序列中功能注釋為甲基轉(zhuǎn)移酶的蛋白,使用MEGA 6自帶的ClustalW與來(lái)自于marformycins生物合成途徑中的Mfn G(D/L-酪氨酸甲基化酶)進(jìn)行多序列比對(duì),用鄰接法(Neighbor-Joining)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù),篩選到與MfnG進(jìn)化關(guān)系最近的Orf03255(Mcb D);擴(kuò)增mcbD后克隆至pET28a(+)并在E.coli BL21(DE3)中表達(dá),結(jié)合Ni-NTA親和層析法純化獲取較高純度的McbD活性蛋白;以marinacarboline B為底物,利用高效液相色譜檢測(cè)McbD的體外酶活;利用基于PCR-targeting的遺傳操作體系構(gòu)建mcb D插入失活突變株((35)mcbD)并分析其與野生型菌株的發(fā)酵產(chǎn)物差異�！窘Y(jié)果】N-末端融合組氨酸標(biāo)簽的McbD蛋白在E.coli BL21(DE3)中可溶性表達(dá),親和層析純化的McbD能夠以marinacarboline B為底物催化形成marinacarboline C;mcbD基因阻斷突變株ΔmcbD與野生型相比不產(chǎn)生化合物marinacarboline C,同時(shí)累積marinacarboline B�！窘Y(jié)論】McbD為marinacarbolines生物合成中必需的O-甲基轉(zhuǎn)移酶。
[Abstract]:[objective] to locate the mcbD gene responsible for marinacarbolines methylation modification in the genome of Marinactinospora thermotolerans SCSIO 00652 and to identify its function. [methods] the genome sequence of free M.thermotolerans SCSIO 00652 was annotated as a methyltransferase protein. Using MEGA 6's own ClustalW and Mfn Gon D / L tyrosine methylase from the marformycins biosynthesis pathway, a phylogenetic tree was constructed by using neighbor method (Neighbor-Jointing). Orf03255(Mcb DX, which had the closest relationship with MfnG evolution, was screened, cloned into pET28a () and expressed in E.coli BL21DE3, then purified by Ni-NTA affinity chromatography to obtain high purity McbD active protein. Marinacarboline B was used as substrate. High performance liquid chromatography (HPLC) was used to detect the enzyme activity of McbD in vitro. PCR-targeting based genetic manipulation system was used to construct a mcb D insertion inactivated mutant, CbD35, and to analyze its difference from the wild-type strain. [results] the N-terminal fusion histidine tagged McbD protein was soluble expressed in E.coli BL21D3. McbD purified by affinity chromatography could catalyze the formation of marinacarboline CmcbD gene blocking mutant 螖 mcbD with marinacarboline B as substrate, and not produce a compound marinacarboline C and accumulate marinacarboline B. [conclusion] McbD is the necessary Omethyltransferase in marinacarbolines biosynthesis.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所中國(guó)科學(xué)院熱帶海洋生物資源與生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣東省海洋藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中國(guó)科學(xué)院海洋微生物研究中心;中國(guó)科學(xué)院大學(xué);
【基金】：安徽醫(yī)科大學(xué)博士科研資助基金(XJ201512) 國(guó)家自然科學(xué)基金(41406195)~~
【分類號(hào)】：Q78

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本文編號(hào)：1840388