本文選題：水仙 + ACC氧化酶��； 參考：《西北植物學(xué)報(bào)》2017年09期

【摘要】：利用RT-PCR技術(shù),從‘云香’水仙中克隆了1個(gè)新的ACO(ACC氧化酶)基因(NtACOY2)。NtACOY2基因全長(zhǎng)975bp,開(kāi)放閱讀框(ORF)936bp,編碼311個(gè)氨基酸殘基,蛋白分子量為35.83kD。蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),該蛋白含有典型的ACO家族保守的DIOX_N和20G-FeⅡ_Oxy結(jié)構(gòu)域。進(jìn)化分析表明,NtACOY2編碼的氨基酸序列高度保守。實(shí)時(shí)熒光定量PCR表明,NtACOY2在花瓣和副冠中的表達(dá)均隨著‘云香’水仙花的衰老而逐漸上升,并且各個(gè)時(shí)期花瓣中的表達(dá)量均高于副冠,在花蕾期的花瓣中表達(dá)量達(dá)到最高,表明NtACOY2基因可能參與‘云香’水仙花的發(fā)育,并且與其花衰老密切相關(guān)。通過(guò)PCR和酶切反應(yīng)鑒定,成功構(gòu)建了NtACOY2基因的正反義植物表達(dá)載體,將正義載體經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化煙草,PCR檢測(cè)顯示共有15株轉(zhuǎn)化植株擴(kuò)增出了與陽(yáng)性對(duì)照大小相同的片段,進(jìn)一步用RT-PCR鑒定陽(yáng)性轉(zhuǎn)化植株,最終獲得了12株轉(zhuǎn)基因煙草。隨機(jī)選取2株轉(zhuǎn)基因植株(Z1、Z2)與野生型(WT)完全相同條件下移栽溫室培養(yǎng),結(jié)果 Z1、Z2分別比WT提前8和7d開(kāi)花,且轉(zhuǎn)基因煙草花朵開(kāi)放數(shù)量均多于野生型,表明NtACOY2在轉(zhuǎn)錄水平能夠正常表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步研究NtACOY2基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:By using RT-PCR technique, a new ACO(ACC oxidase gene, NtACOY2, was cloned from 'Yunxiang' Narcissus. The total length of NtACOY2, NtACOY2 gene was 975bpand ORF 936bp, encoding 311 amino acid residues, and the molecular weight of protein was 35.83 kD. It was found that the protein contained the conserved DIOX_N and 20G-Fe 鈪，

本文編號(hào)：1840292