紅花DHDPS基因全長cDNA的克隆及植物表達載體構建
本文選題:紅花 + 二氫吡啶二羧酸合酶; 參考:《中草藥》2017年08期
【摘要】:目的克隆紅花賴氨酸生物合成途徑關鍵酶二氫吡啶二羧酸合酶(dihydrodipicolinate synthase DHDPS)基因的全長c DNA序列,構建植物超表達載體。方法根據(jù)紅花轉錄組文庫注釋信息獲得紅花DHDPS(CtDHDPS)基因的中間序列,通過RT-PCR與RACE技術從紅花種子中克隆CtDHDPS基因全長c DNA序列。采用DNA重組技術構建p BASTA-CtDHDPS植物超表達載體。結果分離CtDHDPS基因全長1 309 bp,開放閱讀框954 bp,編碼317個氨基酸,編碼蛋白理論等電點為5.93,相對分子質量約為34 750.79。通過DNA重組技術成功構建了植物超表達載體p BASTA-CtDHDPS。結論獲得CtDHDPS基因全長c DNA序列并成功構建植物超表達載體,為闡明CtDHDPS基因的生物學功能及其在紅花賴氨酸生物合成途徑中作用機制提供科學依據(jù)。
[Abstract]:Objective to clone the full-length c DNA sequence of dihydrodipicolinate synthase synthase, a key enzyme in the biosynthesis pathway of safflower lysine, and to construct a plant overexpression vector. Methods according to the annotated information of Carthamus transcriptome library, the intermediate sequence of CtDHDPS gene was obtained, and the full-length c DNA sequence of CtDHDPS gene was cloned from the seeds of Carthamus safflower by RT-PCR and RACE techniques. The plant superexpression vector of p BASTA-CtDHDPS was constructed by DNA recombination technique. Results the total length of CtDHDPS gene was 1 309 BP, open reading frame 954 BP, encoding 317 amino acids, the theoretical isoelectric point of encoding protein was 5.93, and the relative molecular weight was about 34 750.79. The plant superexpression vector pBASTA-CtDHDPSS was successfully constructed by DNA recombination technique. Conclusion the full-length c DNA sequence of CtDHDPS gene was obtained and the plant overexpression vector was successfully constructed, which provides a scientific basis for elucidating the biological function of CtDHDPS gene and its mechanism in the biosynthesis pathway of lysine in safflower.
【作者單位】: 吉林農業(yè)大學中藥材學院;吉林農業(yè)大學生物反應器與藥物開發(fā)教育部工程研究中心;吉林農業(yè)大學科技管理處;吉林農業(yè)大學生命科學學院;
【基金】:國家自然科學基金資助項目(31401445) 吉林省教育廳“十三五”科學技術項目(JJKH20170310KJ) 吉林省科技廳醫(yī)藥產業(yè)推進計劃項目(20140311034YY) 國家高技術研究發(fā)展計劃(“863”)項目(2011AA100606) 2017年吉林農業(yè)大學大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目
【分類號】:S567.219
【參考文獻】
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本文編號:1837361
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