大腸埃希菌ETT2毒力島ECs3703基因和HPI毒力島irp2基因雙重LAMP檢測(cè)方法的建立
發(fā)布時(shí)間:2018-05-03 04:25
本文選題:大腸埃希菌 + ETT毒力島。 參考:《動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展》2017年01期
【摘要】:根據(jù)GenBank中大腸埃希菌ETT2毒力島保守基因ECs3703和HPI毒力島的保守基因irp2分別設(shè)計(jì)一套LAMP引物,在同一體系中進(jìn)行LAMP擴(kuò)增,通過(guò)對(duì)體系Mg2+、dNTP、內(nèi)引物及反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間等進(jìn)行優(yōu)化,建立了在60℃恒溫下對(duì)大腸埃希菌ETT2和HPI毒力島進(jìn)行同步檢測(cè)的LAMP方法,并進(jìn)行了特異性和靈敏性試驗(yàn)。結(jié)果顯示,所建立的雙重LAMP檢測(cè)方法同時(shí)檢測(cè)ETT2和HPI毒力島大腸埃希菌檢測(cè)限均可達(dá)到100fg,比常規(guī)PCR靈敏度高100倍。利用該方法對(duì)8株非大腸埃希菌進(jìn)行LAMP擴(kuò)增,結(jié)果均為陰性。用該方法對(duì)采集的20份臨床樣品進(jìn)行檢測(cè),與雙重PCR檢測(cè)結(jié)果一致。結(jié)果顯示,該雙重LAMP方法可用于大腸埃希菌ETT2和HPI毒力島的同步快速檢測(cè),可作為臨床疫病診斷的有效手段。
[Abstract]:According to the conserved gene irp2 of Escherichia coli ETT2 virulence island ECs3703 and HPI virulence island in GenBank, a set of LAMP primers were designed for LAMP amplification in the same system. The system was optimized by Mg2 dNTP, internal primer, reaction temperature and reaction time. A LAMP method for simultaneous detection of Escherichia coli ETT2 and HPI virulence islands at 60 鈩,
本文編號(hào):1836970
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