本文選題：萊茵衣藻 + 農(nóng)桿菌轉化法��； 參考：《西北大學學報(自然科學版)》2017年01期

【摘要】：甘油3-磷酸酰基轉移酶基因(gpd1)可以調控植物脂質代謝中關鍵酶甘油-3-磷酸脫氫酶(GPDH)的活性,能促進植物脂質合成。本研究以萊茵衣藻FACHB-479為受體,通過克隆酵母gpd1基因,構建萊茵衣藻的農(nóng)桿菌雙元表達載體pRI-Ble-GPD1,首次以農(nóng)桿菌介導法將攜帶在農(nóng)桿菌LBA4404的gpd1基因轉移到FACHB-479基因組。在含有10μg/m L博萊霉素的TAP平板篩選得到抗性藻體細胞。經(jīng)過分子生物學PCR及RTPCR鑒定,獲得轉基因藻FACHB-GPD。尼羅紅染色法鑒定分析FACHB-GPD細胞中油脂含量增高1.3~1.52倍。該研究表明農(nóng)桿菌介導外源gpd1基因在萊茵衣藻FACHB-479基因組的過表達能增加脂肪酸含量,從而提高其產(chǎn)油能力。
[Abstract]:Glycerol 3-phosphate transferase gene (gpd1) can regulate the activity of glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH), a key enzyme in plant lipid metabolism, and promote plant lipid synthesis. In this study, the bivariate expression vector pRI-Ble-GPD1 was constructed by cloning the yeast gpd1 gene from Chlamydomonas rhinella FACHB-479, and the gpd1 gene carrying Agrobacterium LBA4404 was transferred to the FACHB-479 genome by Agrobacterium-mediated method for the first time. TAP plate containing 10 渭 g / mL bleomycin was used to screen resistant algal somatic cells. The transgenic algae FACHB-GPDwas obtained by molecular biological PCR and RTPCR identification. The oil content in FACHB-GPD cells was 1.52 times higher than that in FACHB-GPD cells by Nile red staining. This study indicated that the overexpression of exogenous gpd1 gene in FACHB-479 genome of Chlamydomonas rhinorrhoeae could increase the fatty acid content and increase its oil production ability by Agrobacterium tumefaciens (Agrobacterium tumefaciens).
【作者單位】： 西部資源與現(xiàn)代生物技術省部共建教育部重點實驗室/陜西省生物重點實驗室/西北大學生命科學學院;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(31270411,31572665) 陜西省科技廳社會發(fā)展攻關計劃基金資助項目(2012K12-01-02) 陜西省教育廳專項基金資助項目(12JK0827)
【分類號】：Q943.2

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本文編號：1834561