本文選題：水楊酸 + 青蒿　； 參考：《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》2017年08期

【摘要】：目的:研究青蒿異分支酸合酶的表達(dá)模式,評(píng)價(jià)其對(duì)青蒿素含量的影響。創(chuàng)新點(diǎn):該研究首次克隆了青蒿異分支酸合酶基因(AaICS1),并發(fā)現(xiàn)AaICS1影響青蒿素的合成,為更有效地開(kāi)發(fā)利用青蒿提供了新思路。方法:根據(jù)青蒿轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)克隆AaICS1基因和啟動(dòng)子,并進(jìn)行多重序列分析和啟動(dòng)子作用元件預(yù)測(cè)。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR(q RT-PCR)對(duì)AaICS1進(jìn)行表達(dá)分析,用Southern雜交分析AaICS1的拷貝數(shù)。構(gòu)建AaICS1過(guò)表達(dá)載體和干擾表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化青蒿獲得轉(zhuǎn)基因植株,用高效液相色譜法(HPLC)分析青蒿素含量。結(jié)論:AaICS1含一個(gè)總長(zhǎng)為1710 bp的完整閱讀框,編碼570個(gè)氨基酸,與其它植物的ICS基因具有較高的相似性。Southern雜交結(jié)果表明AaICS1為單拷貝(圖4),q RT-PCR結(jié)果顯示該基因能夠響應(yīng)傷害、干旱、鹽脅迫和水楊酸的處理,處理后基因表達(dá)量提高(圖6),和啟動(dòng)子作用元件預(yù)測(cè)相符。q RT-PCR結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因青蒿中AaICS1表達(dá)量提高,干擾轉(zhuǎn)基因青蒿中該基因表達(dá)量降低(圖7)。HPLC顯示過(guò)表達(dá)AaICS1轉(zhuǎn)基因植株中青蒿素含量提升,最高可達(dá)對(duì)照的1.9倍(圖8)。
[Abstract]:Aim: to study the expression pattern of artemisinin synthase and evaluate its effect on artemisinin content. Innovation: this study first cloned AaICS1 gene of Artemisia annua, and found that AaICS1 affects the synthesis of artemisinin, which provides a new idea for the development and utilization of Artemisia annua. Methods: based on the transcriptional data of Artemisia annua, AaICS1 gene and promoter were cloned by polymerase chain reaction (PCR). The expression of AaICS1 was analyzed by real-time quantitative PCR(q RT-PCR, and the copy number of AaICS1 was analyzed by Southern hybridization. AaICS1 overexpression vector and interfering expression vector were constructed and transformed into Artemisia annua to obtain transgenic plants. The content of artemisinin was analyzed by HPLC. Conclusion: AaICS1 contains a complete reading frame with a total length of 1710 BP and encodes 570amino acids. The results of Southern blotting show that AaICS1 is a single copy with the ICS gene of other plants. (fig. 4) Q RT-PCR results show that the gene can respond to injury and drought. After salt stress and salicylic acid treatment, gene expression increased (Fig. 6, predicted by promoter acting element. Q RT-PCR results showed that AaICS1 expression was increased in transgenic Artemisia annua. The expression of Artemisinin in transgenic Artemisia annua interferentially decreased (Fig. 7).HPLC showed that the content of artemisinin in transgenic plants with overexpression of AaICS1 was increased to 1.9 times of that of control (Fig. 8).
【作者單位】： Plant
【基金】：supported by the National High-Tech R&D Program(863)of China(No.22011AA100605)
【分類號(hào)】：Q943.2

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本文編號(hào)：1833545