本文選題：舞毒蛾 + 轉基因果蠅�。� 參考：《林業(yè)科學》2017年06期

【摘要】：【目的】舞毒蛾是林業(yè)重要害蟲,細胞色素P450是昆蟲體內廣泛分布的參與外源化合物代謝關鍵酶系,探討P450家族基因CYP6AN15v1對殺蟲劑代謝解毒功能,為舞毒蛾有效治理提供依據。【方法】通過RT-PCR法獲得Ld CYP6AN15v1基因c DNA全長,采用傳統酶切連接的方法構建轉CYP6AN15v1基因果蠅載體,通過轉基因技術獲得表達Ld CYP6AN15v1果蠅品系(命名為att P40CYP6AN15v1)。采用分光光度計法研究低劑量氯蟲苯甲酰胺(7.17mg·L~(-1))處理對轉基因和非轉基因果蠅品系細胞色素P450活性的影響,并采用qRT-PCR法測定其對CYP6AN15v1基因表達的影響�！窘Y果】從舞毒蛾無參照轉錄本文庫中克隆獲得CYP6AN15v1全長基因,編碼512個氨基酸,蛋白分子質量為59.02 k Da;系統進化樹分析表明CYP6AN15v1與甜菜夜蛾和棉鈴蟲關系較近。以DNA和c DNA為模板,att P40CYP6AN15v1果蠅品系均檢測到1 539 bp目的基因,表明Ld CYP6AN15v1基因成功整合到果蠅基因組。與非轉基因att P40果蠅品系相比,轉基因att P40CYP6AN15v1果蠅品系對氯蟲苯甲酰胺的敏感性顯著降低,致死中濃度LC50為非轉基因果蠅的2.92倍;低劑量(7.17 mg·L~(-1))氯蟲苯甲酰胺脅迫下,舞毒蛾細胞色素P450酶活性和CYP6AN15v1基因的誘導作用呈現時間效應,att P40CYP6AN15v1果蠅品系P450活性為非轉基因果蠅的1.09~1.93倍,主要表現為誘導效應;att P40CYP6AN15v1果蠅品系的CYP6AN15v1基因mRNA表達量呈誘導激活,其表達量為非轉基因的44.54~137.80倍�！窘Y論】利用轉基因技術成功構建了轉Ld CYP6AN15v1果蠅品系att P40CYP6AN15v1;氯蟲苯甲酰胺可能通過誘導Ld CYP6AN15v1基因mRNA的上調表達而增強黑腹果蠅P450酶活性,從而參與對氯蟲苯甲酰胺的解毒作用。
[Abstract]:[objective] Cytochrome P450 is one of the most important insect pests in forestry. Cytochrome P450 is the key enzyme system involved in the metabolism of exogenous compounds, and the detoxification function of P450 family gene CYP6AN15v1 on the metabolism of insecticides was studied. [methods] the full-length c DNA of Ld CYP6AN15v1 gene was obtained by RT-PCR method. The transgenic Drosophila vector of CYP6AN15v1 gene was constructed by traditional restriction endonuclease ligation method. The expression of Ld CYP6AN15v1 Drosophila strain (named att P40CYP6AN15v1) was obtained by transgenic technique. The effects of low dose chlorfenzoate (7.17mg / L) treatment on cytochrome P450 activity in transgenic and non-transgenic Drosophila strains were studied by spectrophotometer. The effect of CYP6AN15v1 on the expression of CYP6AN15v1 gene was determined by qRT-PCR method. [results] the full-length CYP6AN15v1 gene was cloned from the library of non-reference transcripts of Hymenoptera moths and encoded 512 amino acids. The molecular weight of protein was 59.02 K Da.The phylogenetic tree analysis showed that CYP6AN15v1 had close relationship with Spodoptera exigua and Helicoverpa armigera. Using DNA and c DNA as templates, 1 539bp target gene was detected in Drosophila melanogaster strains, indicating that Ld CYP6AN15v1 gene was successfully integrated into the genome of Drosophila melanogaster. Compared with non-transgenic att P40 strain, the sensitivity of transgenic att P40CYP6AN15v1 Drosophila strain to chlorobenzamide was significantly decreased, the median lethal concentration of LC50 was 2.92 times of that of non-transgenic Drosophila melanogaster, and the low dose of LC50 was 7.17 mg / L ~ (-1) under benzoamide stress. The activity of cytochrome P450 enzyme and the induction of CYP6AN15v1 gene showed a time effect of 1.09 times of that of non-transgenic Drosophila melanogaster strain P450, which mainly showed that the expression of CYP6AN15v1 gene mRNA was induced and activated. [conclusion] transgenic fruit fly strain att P40CYP6AN15v1 was successfully constructed by transgenic technique, and chlorfenzoamide may enhance the P450 activity of Drosophila melanogaster by inducing the up-regulation of mRNA expression of Ld CYP6AN15v1 gene. Thus participate in the detoxification of p-chlorfenzoamide.
【作者單位】： 東北林業(yè)大學林學院;
【基金】：國家自然科學基金項目(31570642) 黑龍江省自然科學基金項目(C201409) 東北林業(yè)大學本科生創(chuàng)新項目(201510225183)
【分類號】：S763.42

【參考文獻】

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