本文選題：莖尖 + 愈傷組織�。� 參考：《甘肅農(nóng)業(yè)大學》2017年碩士論文

【摘要】：本研究選取三個小麥品種,甘春20號、甘春24號、中麥175為試驗材料,進行莖尖愈傷組織培養(yǎng)及植株再生的研究,探討了基因型、莖尖生長天數(shù)及切取部位、培養(yǎng)基、激素(2,4-D,KT與6-BA)對愈傷組織誘導、分化及植株再生的影響。初步建立了中麥175莖尖愈傷組織培養(yǎng)及植株再生體系,并對其優(yōu)化。對中麥175莖尖愈傷組織進行遺傳轉化,探討了影響農(nóng)桿菌介導的遺傳轉化因素,初步建立了農(nóng)桿菌介導的中麥175莖尖遺傳轉化體系,成功的將Cl5227基因轉入小麥中。研究結果如下:(1)通過對甘春20號,甘春24號,中麥175進行莖尖愈傷組織培養(yǎng),經(jīng)分析得出,不同基因型對莖尖愈傷組織誘導及分化有顯著的影響;篩選出再生能力好的品種-中麥175,用于下一步的試驗;生長3d的莖尖基部第一切段為愈傷組織培養(yǎng)最佳部位;確定了最佳愈傷組織誘導培養(yǎng)基:MS基本成分+2,4-D 2mg/L+CH0.5g/L+Pro 0.5g/L+Gln 0.25g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L,p H=5.8;2,4-D濃度顯著影響莖尖愈傷組織的誘導,隨著2,4-D濃度的升高,誘導率呈先升高后降低的趨勢,濃度為2mg/L的2,4-D最適宜愈傷的誘導;最佳分化培養(yǎng)基為:MS基本成分+CH0.5g/L+Pro 0.5 g/L+Gln 0.25 g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L+KT 2mg/L+6-BA 2mg/L,pH=5.8。其中,6-BA與K T濃度均達到2mg/L時分化率達到最大。(2)通過對農(nóng)桿菌介導的中麥175莖尖進行遺傳轉化,研究發(fā)現(xiàn),侵染時間、菌液濃度、共培養(yǎng)時間對愈傷組織遺傳轉化有很大影響;愈傷組織的存活率隨侵染時間的延長表現(xiàn)出降低的趨勢,菌液濃度OD600=0.6,菌液時間為30min時分化率達到最大;莖尖愈傷組織共培養(yǎng)時間對轉化的影響中,侵染后的愈傷組織在共培養(yǎng)3d時,分化率達到最大,為共培養(yǎng)適宜天數(shù)。500 mg/L頭孢霉素(Cef)加入誘導篩選培養(yǎng)基和分化篩選培養(yǎng)基中,可以有效抑制農(nóng)桿菌生長,且對小麥莖尖愈傷組織的生長影響較小。經(jīng)誘導篩選21d后的愈傷組織,放置在加入5mg/L卡那霉素的分化篩選培養(yǎng)基上,得到的分化率較高,可有效的進行抗性愈傷的篩選。(3)經(jīng)培養(yǎng)基抗性篩選后得到2株抗性植株,但經(jīng)PCR檢測,只有1株抗性植株呈陽性。
[Abstract]:In this study, three wheat varieties, Ganchun 20, Ganchun 24 and Zhongmai 175, were selected as experimental materials to study the callus culture and plant regeneration of stem tip. The genotypes, days of shoot tip growth, cutting position and culture medium were discussed. The effects of KT and 6-BA) on callus induction, differentiation and plant regeneration. The callus culture and plant regeneration system of Zhongmai 175 were established and optimized. The genetic transformation of the stem tip callus of Zhongmai 175 was carried out, and the factors affecting the genetic transformation mediated by Agrobacterium tumefaciens were discussed. The Agrobacterium tumefaciens mediated genetic transformation system of the stem tip of Zhongmai 175 was established, and the Cl5227 gene was successfully transferred into wheat. The results were as follows: 1) Callus culture of stem tip of Ganchun 20, Ganchun 24 and Zhongmai 175 was carried out. The results showed that different genotypes had significant effects on callus induction and differentiation. Zhongmai 175, a variety with good regeneration ability, was selected for further experiment, and the best part of callus culture was at the base of stem tip for 3 days. The optimum medium for callus induction was determined as follows: the concentration of 2n4-D 2mg/L CH0.5g/L Pro 0.5g/L Gln 0.25g/L sucrose 30g/L Agar (6g / L) significantly affected the callus induction at stem tip. With the increase of 24-D concentration, the induction rate increased first and then decreased. The optimal medium for callus induction was 2mg/L, and the optimal medium for differentiation was CH0.5g/L Pro 0.5 g / L Gln 0.25 g / L sucrose 30g/L Agar 6g/L KT 2mg/L 6-BA 2mg / L 6g/L KT 2mg/L 6-BA 2mg / L, pH = 5.8. The optimum medium for differentiation was CH0.5g/L Pro 0.5 g / L Gln 0.25 g / L sucrose 30g/L. Among them, the concentration of 6-BA and KT reached the maximum rate of 2mg/L time division. (2) the genetic transformation of Zhongmai 175 stem tip mediated by Agrobacterium tumefaciens was carried out. The results showed that infection time, concentration of bacterial solution and co-culture time had great influence on genetic transformation of callus. The survival rate of callus decreased with the increase of infection time. The concentration of OD600,0.6 and the time of 30min were the highest, and the effect of co-culture time of callus on the transformation was observed. The differentiation rate of the infected callus reached the maximum when co-cultured for 3 days. For the suitable days of co-culture, mg/L cefs were added to the induction and screening medium, which could effectively inhibit the growth of Agrobacterium tumefaciens. And the effect on the growth of wheat stem tip callus was small. The callus after 21 days of induction and screening was placed on the differentiation medium with 5mg/L kanamycin, and the rate of differentiation was higher, which could be used to screen the resistant callus effectively, and two resistant plants were obtained after the selection of resistant callus in the medium. But only one resistant plant was positive by PCR.
【學位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S512.1

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8 唐銘;

本文編號：1821003