本文選題：單增李斯特菌 + lmo基因　； 參考：《微生物學(xué)通報(bào)》2017年12期

【摘要】：【目的】單增李斯特菌是一種重要的食源性致病菌,常引起人和動(dòng)物致病。其細(xì)胞壁表面LPXTG基序蛋白在單增李斯特菌致病過(guò)程中發(fā)揮重要作用,根據(jù)參考株全序列預(yù)測(cè)的41個(gè)LPXTG基序蛋白中仍有部分蛋白功能未知。對(duì)單增李斯特菌新疆綿羊腦分離株LM90SB2的LPXTG基序蛋白Lmo0160的基因進(jìn)行克隆及生物信息學(xué)分析,為功能驗(yàn)證提供基礎(chǔ)�！痉椒ā扛鶕�(jù)GenBank中收錄的lmo0160序列設(shè)計(jì)特異性引物,利用PCR方法對(duì)新疆分離株的lmo0160基因進(jìn)行擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到pMD 19-T載體,進(jìn)行PCR、雙酶切鑒定及序列測(cè)定,并對(duì)基因核苷酸序列和蛋白序列進(jìn)行分析�！窘Y(jié)果】分離株LM90SB2的lmo0160序列全長(zhǎng)為1 708 bp,包含1 428 bp的開(kāi)放閱讀框,共編碼475個(gè)氨基酸;LM90SB2株lmo0160核苷酸序列與CFSAN008100株(4b型,美國(guó))、CFSAN023463株(4b型,美國(guó))、J2-064株(4b型,美國(guó))、F2365株(4b型,奶酪,美國(guó))和NTSN株(4b型,綿羊腦,中國(guó)揚(yáng)州)相似性為99.0%-99.1%;與M7株(4a型,牛奶,中國(guó)浙江)相似性為97.2%,與Finland1998株(1/2a型,美國(guó))、N53-1株(1/2a型,熟火腿,瑞士)、N1546株(1/2a型,魚(yú),丹麥)和EGD-e株(1/2a型,美國(guó))相似性為87.2%-91.1%;其推導(dǎo)的氨基酸序列與上述菌株相似性為91.8%-99.4%。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)顯示,LM90SB2菌株的lmo0160基因與CFSAN023463、F2365和NSTN菌株親緣關(guān)系較近,處于同一分支上,而與標(biāo)準(zhǔn)株EGD-e菌株親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)表明,LM90SB2的Lmo0160蛋白為親水性蛋白,無(wú)信號(hào)肽,不形成跨膜結(jié)構(gòu)。蛋白結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)表明Lmo0160蛋白含有膠原蛋白結(jié)合域和Cna B結(jié)構(gòu)域�！窘Y(jié)論】克隆了LM90SB2的lmo0160基因,為進(jìn)一步研究LM90SB2的lmo0160基因功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: Listeria monocytogenes is an important foodborne pathogen, which often causes human and animal diseases. The cell wall surface LPXTG motifs play an important role in the pathogenicity of Listeria monocytogenes. Some of the 41 LPXTG motifs predicted by reference strain are unknown. Cloning and bioinformatics analysis of the Lmo0160 gene of LPXTG motif from LM90SB2, Xinjiang sheep brain isolate of Listeria monocytogenes were carried out. [methods] specific primers were designed according to the lmo0160 sequence included in GenBank. The lmo0160 gene of Xinjiang isolate was amplified by PCR method. The amplified product was cloned into pMD 19-T vector. The nucleotide sequence and protein sequence of the gene were analyzed. [results] the total length of lmo0160 sequence of LM90SB2 was 1 708 BP, containing an open reading frame of 1 428bp, encoding 475-amino acid LM90SB2 strain lmo0160 nucleotide sequence and CFSAN008100 strain 4b type. The similarity of CFSAN023463 strains, FSAN023463 strains, J2-064 strains 4b, F2365 strains 4b, cheese, USA) and NTSN strain 4b, sheep brain, Yangzhou, China) is 99.0-99.1; the similarity with M7 strain 4a, milk, Zhejiang) is 97.2b, and the similarity with Finland1998 strain is 1 / 2a, the similarity is 97.2a, and the similarity is 97.2a with M7 strain 4a, milk, Zhejiang Province, China), and the similarity is 97.2a with Finland1998 strain 4b, cheese, USA) and NTSN strain 4b, sheep brain, Yangzhou, China. The similarity between N53-1 strain and EGD-e strain was 87.2 -91.1%, and the deduced amino acid sequence was 91.8-99.4 and 91.8% -99.4% respectively, and the similarity was 87.2-91.1% between N53-1 strain, cooked ham, N1546 strain (fish, Denmark) and EGD-e strain (1 / 2a, USA), and the deduced amino acid sequence was 91.8-99.4. Phylogenetic tree showed that the lmo0160 gene of LM90SB2 was closely related to CFSAN023463F2365 and NSTN, and was closely related to the standard EGD-e strain. The prediction of protein secondary structure showed that the Lmo0160 protein of LM90SB2 was hydrophilic, no signal peptide and no transmembrane structure. Protein domain prediction showed that Lmo0160 protein contained collagen binding domain and Cna B domain. [conclusion] lmo0160 gene of LM90SB2 was cloned, which laid a foundation for further study of lmo0160 gene function of LM90SB2.
【作者單位】： 石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31360614)~~
【分類(lèi)號(hào)】：S852.61

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本文編號(hào)：1816838