發(fā)布時間：2018-04-26 08:06

  本文選題：漢坦病毒 + 腎綜合征出血熱��； 參考：《河北醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:了解腎綜合征出血熱(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS)疫區(qū)鼠類攜帶漢坦病毒(Hantavirus,HV)的基因特點和變異情況。揭示河北省出血熱疫區(qū)鼠類攜帶HV的基因型別,為防治HV相關(guān)疾病提供依據(jù)。方法:1根據(jù)河北省HFRS的流行強度和地區(qū)分布情況,選擇石家莊某縣級市、保定某縣級市、滄州某縣、邯鄲某縣、唐山某縣和承德某縣6個縣區(qū)為重點研究區(qū)域;2分別在6個區(qū)域的居民區(qū)和野外采用夾夜法捕鼠,總結(jié)各區(qū)域HV宿主動物的密度及鼠種構(gòu)成;3鼠肺勻漿處理,并提取總RNA;4采用Taq Man探針法多重熒光定量RT-PCR技術(shù)對8種HV分兩組進行檢測,漢灘病毒(Hantaan virus,HTNV)、漢城病毒(Seoul virus,SEOV)、普馬拉病毒(Puumala virus,PUUV)、多布拉伐(Dobrava virus,DOBV)為第一組,圖拉病毒(Tula virus,TULV)、黑河渠病毒(Black creek canal virus,BCCV)、安第斯病毒(Andes virus,ANDV)、辛諾畢斯病毒(Sin Nombre virus,SNV)為第二組;5采用一致簡并雜合寡核苷酸引物(Consensus Degenerate Hybrid Oligonucleotide Primers,CODEHOP)RT-PCR檢測鼠肺中HV的基因型別;6挑選核酸檢測結(jié)果為HV陽性的鼠肺標本,進一步利用針對Gc基因片段而設(shè)計的SEOV特異性引物進行PCR擴增,對擴增產(chǎn)物進行核酸序列測定;7對序列進行同源性分析,構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果:1 2015~2016年兩年6個區(qū)域的野外平均鼠密度為0.44%,居民區(qū)平均鼠密度為2.77%,居民區(qū)鼠密度高于野外(χ2=317.995,P0.001)。2015~2016年冀南地區(qū)(石家莊某縣級市、邯鄲某縣)的平均鼠密度為5.36%,冀中地區(qū)(保定某縣級市、滄州某縣)的平均鼠密度為2.58%,冀東地區(qū)(唐山某縣)鼠密度為1.92%,冀北地區(qū)(承德某縣)鼠密度為6.18%。經(jīng)卡方檢驗,可認為冀北和冀南地區(qū)的鼠密度高于冀中和冀東地區(qū)(χ2=336.29,P0.001)。居民區(qū)春季鼠密度高于秋季或基本與秋季持平。2 2015~2016年6個區(qū)域共捕鼠1228只,經(jīng)分類鑒定隸屬于4屬4種,分別為大鼠屬的褐家鼠1043只,小家鼠屬的小家鼠179只,倉鼠屬的大倉鼠5只,姬鼠屬的黑線姬鼠1只。居民區(qū)的優(yōu)勢鼠種為褐家鼠,占居民區(qū)總捕獲數(shù)的84.12%;野外優(yōu)勢鼠種為褐家鼠,占野外總捕獲數(shù)的92.50%。總體來看,河北省6個區(qū)域的優(yōu)勢鼠種為褐家鼠。3對1228份標本進行Taq Man探針法多重熒光定量RT-PCR檢測,共檢出35份HV陽性。4對1228份標本采用CODEHOP體系進行PCR擴增,其中29份鼠肺標本出現(xiàn)特征條帶。5鼠帶毒率為2.85%,毒種均為SEOV。其中居民區(qū)共檢測鼠肺1108份,陽性33份,鼠帶毒率為2.98%;野外共檢測鼠肺120份,陽性2份,鼠帶毒率為1.67%,居民區(qū)鼠帶毒率高于野外(χ2=37.78,P0.05)。35份HV陽性鼠肺標本中褐家鼠29份,小家鼠5份,帶毒率分別為2.78%、2.79%,還有1份為黑線姬鼠(由于標本量太小不宜計算帶毒率)。小家鼠和野棲型的黑線姬鼠攜帶了SEOV,證明該毒種出現(xiàn)了“宿主溢出”現(xiàn)象。在不同區(qū)域方面,冀南地區(qū)帶毒率為2.13%,冀中地區(qū)帶毒率為0.34%,冀東地區(qū)帶毒率為17.81%,冀北地區(qū)帶毒率為5.88%。經(jīng)卡方檢驗結(jié)果顯示(χ2=2513.13,P0.001):冀東地區(qū)鼠帶毒率高于其他地區(qū)。6對35份HV陽性鼠肺標本采用針對Gc基因片段的SEOV型特異性引物進行PCR擴增,8份標本的擴增產(chǎn)物在預(yù)期位置出現(xiàn)了目的條帶。7對整理獲得的7份L片段進行核酸擴增及同源性比較,7份標本之間核酸序列同源性為94.0%~98.3%,7份標本與浙江省SEOV的ZT10株及韓國SEOV的80-39株的同源性較高。L片段系統(tǒng)發(fā)育樹顯示7份標本均處于SEO型HV的分支上,親緣關(guān)系較近,由此可判斷7份標本均屬于SEO型HV。8份Gc片段核酸擴增及同源性比較結(jié)果顯示,8份標本間核酸序列同源性為98.1%~99.7%,與SEOV型北京市Bj HD01株,河北省HBQ20株、HBQ43株,山東省GM04-38株、ZB8株處在同一進化分支,親緣關(guān)系較近,均屬于S3亞型。結(jié)論:1河北省出血熱疫區(qū)居民區(qū)的鼠密度及鼠帶毒率高于野外。褐家鼠是河北省出血熱疫區(qū)的優(yōu)勢鼠種。2河北省出血熱疫區(qū)宿主動物攜帶的HV基因型為SEO型,未發(fā)現(xiàn)其他型別HV。3河北省出血熱疫區(qū)宿主動物攜帶的SEOV基因亞型較單一,僅為S3亞型。4河北省非優(yōu)勢鼠種小家鼠和黑線姬鼠均攜帶SEO型HV,存在“宿主溢出”現(xiàn)象。
[Abstract]:鐩殑:浜嗚В鑲劇患鍚堝緛鍑鴻鐑，

本文編號：1805168