發(fā)布時間：2018-04-20 01:21

  本文選題：Wip + 乳腺腫瘤��； 參考：《重慶醫(yī)學(xué)》2017年33期

【摘要】：目的構(gòu)建Wip1基因重組慢病毒表達(dá)載體,研究其對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法以慢病毒感染方法將Wip 1的短發(fā)夾狀RNA(shRNA)轉(zhuǎn)入乳腺癌MCF-7細(xì)胞。采用qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞Wip1mRNA、蛋白的表達(dá),MTT法、流式細(xì)胞術(shù)及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測Wip1-shRNA對MCF-7細(xì)胞增殖、凋亡、周期及侵襲轉(zhuǎn)移的影響。篩選具有抑制p53基因表達(dá)的干擾RNA分子p53dsRNA,并分析其干擾后對乳腺癌MCF-7細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果轉(zhuǎn)染48h后,Wip1-shRNA組細(xì)胞熒光較強(qiáng),NC-shRNA組較弱。Wip1-shRNA組細(xì)胞Wip1mRNA和蛋白的表達(dá)分別為0.291±0.025、0.203±0.021與NC-shRNA組0.954±0.090、0.963±0.092比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。兩組各時間點(diǎn)細(xì)胞存活率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。NC-shRNA組早期與晚期細(xì)胞的凋亡數(shù)少于Wip1-shRNA組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。NC-shRNA組細(xì)胞G0+G1期、S期細(xì)胞數(shù)分別為53.5±3.6、27.3±1.5,Wip1-shRNA組分別為72.3±5.2、14.6±0.8,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Transwell侵襲轉(zhuǎn)移結(jié)果表明,NC-shRNA組細(xì)胞的穿膜數(shù)均多于Wip1-shRNA組(P0.05)。對照組細(xì)胞中p53mRNA的表達(dá)、細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的穿膜數(shù)與p53dsRNA組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 RNA干擾可有效抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞Wip1表達(dá),Wip1可能通過調(diào)控蛋白表達(dá)影響乳腺癌細(xì)胞增殖、凋亡、周期與侵襲轉(zhuǎn)移,p53dsRNA干擾p53基因下調(diào)后增加乳腺癌MCF-7細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力。
[Abstract]:Objective to construct the recombinant lentivirus expression vector of Wip1 gene and study its effect on the biological behavior of breast cancer cells. Methods the short hairpin RNAs of Wip 1 were transfected into breast cancer MCF-7 cells by lentivirus infection. Wip1mRNAs before and after transfection were detected by qRT-PCR and Western blot. The effects of Wip1-shRNA on proliferation, apoptosis, cell cycle, invasion and metastasis of MCF-7 cells were detected by flow cytometry and Transwell invasion assay. To screen the interfering RNA molecule p53dsRNAs which can inhibit p53 gene expression and analyze the effect of the interference on the invasion and metastasis of breast cancer MCF-7 cells. Results the expression of Wip1mRNA and protein in Wip1-shRNA group was 0.291 鹵0.025 鹵0.021 and 0.954 鹵0.090 鹵0.963 鹵0.092 in Wip1-shRNA group, respectively. There was significant difference in the expression of Wip1mRNA and protein between Wip1-shRNA group and NC-shRNA group (P 0.05). The cell survival rate at each time point in the two groups was significantly lower than that in the Wip1-shRNA group, and the number of apoptosis in the early and late stage of NC-shRNA group was lower than that in the Wip1-shRNA group. The number of S phase cells in G0 G 1 phase of NC-shRNA group was 53.5 鹵3.6N 27.3 鹵1.5% Wip1-shRNA group was 72.3 鹵5.2U 14.6 鹵0.8, respectively. The difference was statistically significant (P 0.05) .Transwell invasion and metastasis results showed that NC-shRNA group had more penetrating membrane number than Wip1-shRNA group (P 0.05). The expression of p53mRNA and the number of cell invasion and metastasis in the control group were significantly higher than those in the p53dsRNA group (P 0.05). Conclusion RNA interference can effectively inhibit the expression of Wip1 in breast cancer MCF-7 cells and may affect the proliferation, apoptosis, cell cycle and invasion and metastasis of breast cancer MCF-7 cells after p53dRNA interference p53 gene down-regulates the ability of invasion and metastasis of breast cancer MCF-7 cells.
【作者單位】： 河北省唐山市工人醫(yī)院乳腺外科;河北省唐山市婦幼保健院婦產(chǎn)科;河北省唐山市人民醫(yī)院放化療科;
【基金】：2015年度河北省醫(yī)學(xué)科研重點(diǎn)課題計(jì)劃(20150953)
【分類號】：R737.9

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本文編號：1775604