發(fā)布時(shí)間：2018-04-16 15:30

  本文選題：抑制素 + 基因免疫　； 參考：《湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：本研究采用酶聯(lián)免疫測(cè)定、組織切片技術(shù)、熒光定量PCR和蛋白免疫印跡等方法與手段,分析口服新型非抗性抑制素基因疫苗對(duì)雄性大鼠精子發(fā)育、睪丸組織結(jié)構(gòu)、激素水平及精子發(fā)生相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)作用,探究新型抑制素基因疫苗對(duì)大鼠精子發(fā)生的作用機(jī)制。1口服抑制素基因疫苗對(duì)雄性大鼠免疫應(yīng)答的影響用不同菌落數(shù)新型抑制素基因疫苗PXAIS (1010CFU/mL,109CFU/mL,108CFU/mL)各4mL口服免疫大鼠,初次免疫二周后加強(qiáng)免疫二次,用ELISA檢測(cè)不同時(shí)期血清抗體吸光值。研究結(jié)果表明：(1)三個(gè)免疫組血清抗體P／N值均有不同程度的升高,中劑量組在第一次加強(qiáng)免疫后第一周P／N值(1.64+0.21)與對(duì)照組相比有極顯著差異(P0.01);(2)高劑量組在第一次加強(qiáng)免疫后第一周P／N值(1.49+0.30)與對(duì)照組有顯著差異(P0.05);(3)低劑量組在第一次加強(qiáng)免疫后第一周P／N值(1.56+0.35)與對(duì)照組相比有顯著差異(P0.05)。2口服抑制素基因疫苗對(duì)雄性大鼠精子發(fā)育的影響斷頸處理大鼠以檢測(cè)大鼠臟器系數(shù)、臟器體積、精子數(shù)和畸形率的變化,研究結(jié)果表明：(1)實(shí)驗(yàn)組睪丸體積明顯升高,且低劑量在和中劑量組大鼠睪丸體積與對(duì)照組相比差異顯著(P0.05),但對(duì)對(duì)附睪體積沒(méi)有明顯影響(P0.05);(2)高劑量組睪丸系數(shù)(0.93±0.06)與對(duì)照組相比差異極顯著(P0.01),低劑量組附睪系數(shù)(0.27±0.02)與對(duì)照組相比差異顯著(P0.05),各實(shí)驗(yàn)組精囊腺臟器系數(shù)與對(duì)照組相比沒(méi)有顯著影響(P0.05);(3)實(shí)驗(yàn)組精子數(shù)量升高,畸形率降低,其中高劑量組精子數(shù)量(8.41+0.63)和畸形率(19.88+2.72)與空質(zhì)粒組相比差異顯著(P0.05),且中劑量組精子數(shù)量(9.58+2.19)和畸形率(18.50+2.30)與空質(zhì)粒組相比有極顯著差異(P0.01)。3口服抑制素基因疫苗對(duì)雄性大鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)的影響HE染色后在光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠睪丸組織形態(tài)學(xué)變化,研究結(jié)果表明：(1)各組睪丸組織生精小管外有完整的基膜,生精細(xì)胞發(fā)育正常,層次較清楚；(2)各組生精小管內(nèi)生精細(xì)胞數(shù)量不同,中劑量組和對(duì)照組相比,生精細(xì)胞層數(shù)增加,管壁基膜變厚,官腔空隙變窄,腔隙中胞質(zhì)殘余增加。4口服抑制素基因疫苗對(duì)雄性大鼠內(nèi)分泌激素水平的影響本實(shí)驗(yàn)采用ELISA技術(shù)檢測(cè)各組不同時(shí)期血清中抑制素B(INHB)、促卵泡素(FSH)、黃體生成素(LH)和睪酮(T)激素水平變化,研究結(jié)果表明：(1)免疫后三個(gè)實(shí)驗(yàn)組血清抑制素B水平均有不同程度降低,低劑量組在初次免疫后第二周(15.66+0.51)與對(duì)照組相比差異顯著(P0.05),中劑量組在第一次加強(qiáng)免疫后第一周(14.414-1.10)出現(xiàn)最低值,并與對(duì)照和空質(zhì)粒組相比差異極顯著(P0.01);(2)免疫后各實(shí)驗(yàn)組FSH水平與對(duì)照組相比明顯升高,初次免疫后第二周,中劑量組(6.02+0.12)和高劑量組(5.92+0.35)與對(duì)照組和空質(zhì)粒組相比差異極顯著(P0.01),在免疫后第三周里,低劑量組(5.53+0.16)與對(duì)照組相比差異顯著(P0.05);(3)與對(duì)照組相比,低劑量和中劑量組LH有所降低,初次免疫后第一周中劑量組LH水平(14.48+0.67)與空質(zhì)粒組相比差異顯著(P)0.05),初次免疫后第二周LH含量繼續(xù)下降,中劑量組(14.01+0.63)和低劑量組(13.84±0.40)與空質(zhì)粒組差異顯著護(hù)0.05),低劑量組與對(duì)照組差異顯著(P0.05);(4)對(duì)照組和空質(zhì)粒組從第一周到第七周睪酮(T)分泌水平變化不明顯,低劑量組第一次加強(qiáng)免疫后第二周(74.82±4.50)與對(duì)照組差異顯著(P0.05),其余周次均無(wú)明顯變化,初次免疫第一周中劑量組水平(76.41±3.75)升高,且與對(duì)照組相比差異顯著(P)0.05),中劑量組初次免疫后和第一次加強(qiáng)免疫后第二周(86.57±6.29)與對(duì)照組和空質(zhì)粒組相比均差異極顯著(P0.01)。5口服抑制素基因疫苗對(duì)雄性大鼠精子發(fā)生相關(guān)基因和蛋白的影響采用RT-PCR和蛋白免疫印跡分別檢測(cè)大鼠睪丸組織中INHβB、Vimentin、SMAD4基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化,研究結(jié)果表明：(1)抑制素基因疫苗免疫大鼠能降低INHβB亞基表達(dá),中劑量組(19.40±3.60)和對(duì)照組(23.13+1.02)mRNA表達(dá)水平差異顯著(P0.05)；中劑量組和高劑量組蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比均差異極顯著(P0.01)；低劑量組INHβB蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組差異顯著(P0.05)。(2)各免疫組Vimentin mRNA水平表達(dá)升高,三個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中低劑量組(20.14+2.74)與對(duì)照組(17.65±1.49)差異顯著(P0.05),中劑量組(22.01±1.60)與對(duì)照組和空質(zhì)粒組相比均差異極顯著(p0.01),高劑量組(21.09士2.11)與對(duì)照組和空質(zhì)粒組相比差異顯著(P0.05)；各免疫組Vimentin蛋白水平表達(dá)升高,且均與對(duì)照組差異極顯著(p0.01)；(3)中劑量組和高劑量組Smad4 mRNA表達(dá)升高,中劑量組(25.32±3.11)與對(duì)照組(19.93±1.15)和空質(zhì)粒組(19.92±0.89)相比均差異極顯著(P0.01),高劑量組(22.36±1.98)與對(duì)照組和空質(zhì)粒組以及中劑量組相比均有顯著差異(P0.05),低劑量組與對(duì)照組無(wú)明顯差異((P0.05))；免疫組Smad4蛋白表達(dá)水平均上調(diào),中劑量組和高劑量組與對(duì)照組相比均有極顯著差異(P0.01),低劑量組與對(duì)照組差異顯著(P0.05)。綜上,一方面,抑制素基因疫苗能引起雄性大鼠的免疫應(yīng)答,升高精子數(shù)量,降低精子畸形率,促進(jìn)精子發(fā)育；另一方面,免疫降低了雄性大鼠內(nèi)分泌激素抑制素B和LH的的分泌,升高FSH和T的分泌,并上調(diào)了Smad4、Vimentin基因mRNA和蛋白表達(dá)的水平,下調(diào)了INHβB亞基基因mRNA和蛋白表達(dá)的水平,說(shuō)明抑制素基因疫苗免疫能通過(guò)引起雄性大鼠內(nèi)分泌激素水平和基因蛋白表達(dá)的變化,改善雄性大鼠的精子發(fā)生。
[Abstract]:The results showed that : ( 1 ) The serum antibody P / N of the experimental group was significantly higher than that in the control group ( P0.05 ) ; ( 3 ) The number of sperm in the high dose group was higher than that in the control group ( P0.05 ) .
Compared with the control group , the levels of LH , FSH , LH and T were significantly higher than those in the control group ( P < 0.05 ) .
Compared with the control group , the expression level of high - dose group and high - dose group was significantly higher than that in the control group ( P0.01 ) .
( 2 ) The level of vimentin mRNA was significantly higher in the low - dose group ( 20.14 + 2.74 ) than that in the control group ( P < 0.01 ) .
The expression of Vimentin in each group was significantly higher than that in the control group ( p < 0.01 ) .
( 3 ) Compared with the control group ( 19.93 鹵 1.15 ) and the empty plasmid group ( 19.92 鹵 0.89 ) , the expression of Smad4 mRNA in the middle dose group and the high dose group was significantly higher than that in the control group ( 19.93 鹵 1.15 ) and the empty plasmid group ( 19.92 鹵 0.89 ) ( P < 0.01 ) .
The expression level of Smad4 protein in the vaccinated group was up - regulated , the middle - dose group and the high - dose group had significant difference compared with the control group ( P0.01 ) , the difference between the low - dose group and the control group was significant ( P0.05 ) . On the one hand , the inhibition of the gene vaccine could induce the immune response of the male rats , increase the sperm count , reduce the sperm deformity rate and promote the development of the sperm ;
On the other hand , immunity decreased the secretion of hormone B and LH in male rats , increased the secretion of FSH and T , up - regulated the level of Smad4 and Vimentin gene mRNA and protein expression , downregulated the level of mRNA and protein expression of INH尾B subunit gene , and indicated that the immunity of the gene vaccine could improve the sperm production of male rats by inducing changes of endocrine hormone level and gene protein expression in male rats .

【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S814.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1759549