本文選題：OsPUT + RNAi��； 參考：《分子植物育種》2017年02期

【摘要】：RNA干擾是一種雙鏈RNA引發(fā)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默技術(shù),具有特異性和高效性,已成為一種基因功能研究的有效手段。在RNA干擾技術(shù)中,干擾片段的選取方式會(huì)影響基因沉默的效果。但是,目前并無(wú)選取干擾片段的固定標(biāo)準(zhǔn)。本研究以水稻多胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因OsPUT1為對(duì)象,在CDS前部、中部和后部分別設(shè)計(jì)了三種不同干擾片段,構(gòu)建基因三個(gè)RNAi載體,借助農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)水稻遺傳轉(zhuǎn)化,得到三種轉(zhuǎn)基因苗;通過(guò)RT-PCR和Q-PCR技術(shù)檢測(cè)目的基因的表達(dá),結(jié)果顯示三個(gè)干擾部位都具有一定的沉默效果,且在CDS的中間位置干擾效果最好。說(shuō)明OsPUT1在進(jìn)行RNAi載體構(gòu)建時(shí),應(yīng)考慮在CDS的中間位置進(jìn)行干擾。
[Abstract]:RNA interference is a post-transcriptional gene silencing technique induced by double-stranded RNA. It is specific and efficient and has become an effective method for gene function research.In RNA interference, the selection of interference fragments will affect the effect of gene silencing.However, there is no fixed standard for selecting interference fragments.In this study, three different interference fragments were designed in the front, middle and posterior parts of CDS to construct three RNAi vectors of rice polyamine transporter gene (OsPUT1). Three transgenic seedlings were obtained by Agrobacterium tumefaciens EHA105 mediated rice genetic transformation.RT-PCR and Q-PCR techniques were used to detect the expression of the target gene. The results showed that the three interference sites had a certain silencing effect, and the interference effect was the best in the middle position of CDS.It is suggested that the interference in the middle position of RNAi should be considered in the construction of RNAi carrier by OsPUT1.
【作者單位】： 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院湖南省作物種植資源創(chuàng)新和利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;
【基金】：湖南省研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目(CX2015B239)資助
【分類(lèi)號(hào)】：Q943.2

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本文編號(hào)：1759019