本文選題：鼻炎 + 變應(yīng)性　； 參考：《臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志》2017年08期

【摘要】：目的:探索干擾小鼠GATA-3基因的慢病毒載體的構(gòu)建與鑒別方法。方法:分析小鼠單個核細胞內(nèi)GATA-3基因的編碼區(qū),設(shè)計并合成3條最佳動力學(xué)參數(shù)靶點干擾序列的單鏈oligo。利用PCR技術(shù)對合成的單鏈oligo進行拼接反應(yīng),將合成好的序列裝入shRNA慢病毒載體并轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細胞DH5α,測序并鑒定重組克隆中的基因序列后構(gòu)建shRNA-GATA-3表達載體。根據(jù)不同的干擾序列將慢病毒載體分為4組:siRNA-685(LV3-GATA-3-Mus-685)組、siRNA-1152(LV3-GATA-3-Mus-1152)組、siRNA-1615(LV3-GATA-3-Mus-1615)組和對照組。將shRNA載體分別與表達載體共轉(zhuǎn)染入293T細胞,通過qPCR檢測篩選出最優(yōu)干擾序列。將篩選到最佳的LV3-GATA-3-Mus-1615干擾序列構(gòu)建入慢病毒載體,用構(gòu)建的慢病毒干擾載體和包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,包裝病毒,收集病毒原液,超速離心濃縮,并測定滴度。結(jié)果:克隆測序驗證無誤,慢病毒載體構(gòu)建成功。siRNA-1615組GATA-3mRNA相對表達量(0.004)與siRNA-685組(0.009)、siRNA-1152組(0.009)和對照組(0.022)相比明顯減少,LV3-GATA-3-Mus-1615為最佳的干擾序列。收集的病毒上清測定病毒的滴度為5×10~8 TU/ml。轉(zhuǎn)染實驗48h后,熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染成功。結(jié)論:成功構(gòu)建并鑒定小鼠GATA-3基因RNAi慢病毒載體。
[Abstract]:Objective: to explore the construction and identification of lentivirus vector which interferes with mouse GATA-3 gene.Methods: the coding region of GATA-3 gene in mouse mononuclear cells was analyzed and three target interference sequences with optimal kinetic parameters were designed and synthesized.The synthesized single-stranded oligo was spliced by PCR technique. The synthesized sequence was inserted into the shRNA lentivirus vector and transformed into the competent cell DH5 偽. After sequencing and identifying the gene sequence in the recombinant clone, the shRNA-GATA-3 expression vector was constructed.According to different interference sequences, lentivirus vectors were divided into 4 groups: 1: siRNA-685 (LV3-GATA-3-Mus-685)) group (LV3-GATA-3-Mus-1152)) and control group.The shRNA vector and the expression vector were cotransfected into 293T cells, and the optimal interference sequence was screened by qPCR detection.The best LV3-GATA-3-Mus-1615 interference sequence was constructed into lentivirus vector. The vector was co-transfected into 293T cells. The virus was packaged, the virus solution was collected, the concentration was determined by ultracentrifugation, and the titer was measured.Results: cloning and sequencing proved that lentivirus vector constructed successfully. SiRNA-1615 group GATA-3mRNA relative expression was 0.004) compared with siRNA-685 group 0.009 siRNA-1152 group (0.009) and control group (0.022) significantly reduced LV3-GA-3-Mus-1615 interference sequence.The titer of the collected virus supernatant was 5 脳 10 ~ (8) TU / ml.After 48 hours of transfection, the transfection was observed successfully by fluorescence microscope.Conclusion: the murine GATA-3 gene RNAi lentivirus vector was successfully constructed and identified.
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科;中國科學(xué)院昆明動物研究所動物模型與人類疾病機理重點實驗室;
【基金】：云南省自然基金資助項目(No:2011FZ120)
【分類號】：R765.21

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李振宇;慢病毒載體構(gòu)建及結(jié)構(gòu)優(yōu)化[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);2002年05期

2 主鴻鵠;慢病毒載體及其對低分裂潛能細胞的基因轉(zhuǎn)移[J];白血病.淋巴瘤;2003年01期

3 楊宇娟,裴冬生,徐開林,潘秀英,何徐彭,張成靜;survivin反義RNA的克隆及慢病毒載體的構(gòu)建[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2005年06期

4 焦伊勝;王永來;張淑蘭;王桂玲;;凋亡蛋白抑制因子Livin shRNA慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2008年24期

5 褚波;黃雪峰;唐云明;;慢病毒載體及其應(yīng)用進展[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2008年01期

6 毛穎佳;鄭源強;石艷春;;慢病毒載體及其應(yīng)用的研究進展[J];中國生物制品學(xué)雜志;2009年02期

7 曾錦芳;王少元;;慢病毒載體及其在血液病研究中的應(yīng)用進展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年08期

8 馬強;舒文;李明;吳英松;;一種新型慢病毒載體制備體系的改進[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2011年08期

9 張薇;趙志英;張坤;;慢病毒載體及應(yīng)用研究進展[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年05期

10 何佳平;方_g聃;張帆;孫鳳強;王娟;張敬之;;慢病毒載體轉(zhuǎn)錄通讀率檢測方法的建立[J];生物工程學(xué)報;2013年07期

相關(guān)會議論文 前10條

1 馮東福;畢永延;陳二濤;王永志;楚勝華;;小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒載體的構(gòu)建及神經(jīng)干細胞轉(zhuǎn)染[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 李振宇;徐開林;潘秀英;陳香梅;鹿群先;主鴻鵠;李慧;陳海英;何徐彭;;慢病毒載體的構(gòu)建及其包裝細胞系的建立[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

3 王海彬;;雌激素相關(guān)受體α基因超表達慢病毒載體的構(gòu)建[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

4 張曉宇;秦宜德;王超;張文曉;王巍;何曉光;;牛乳鐵蛋白肽基因的慢病毒載體構(gòu)建[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2010年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2010年

5 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;;慢病毒載體的構(gòu)建、改造及其包裝細胞系的建立[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2005年

6 王玉蘭;任振華;;感染食蟹猴骨髓間充質(zhì)干細胞的病毒載體研究[A];第十三次全國臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2012年

7 黃新鳳;葉金波;蔣英芝;任曉虎;黃培武;劉建軍;;SET shRNA慢病毒載體的構(gòu)建及其在肝細胞中的表達鑒定[A];中國科協(xié)第十四屆年會第十七分會場環(huán)境危害與健康防護研討會論文集[C];2012年

8 楊龍江;侯健;;構(gòu)建含有人血小板因子4和其片段的慢病毒載體[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

9 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;孫海英;主鴻鵠;陳香梅;何徐彭;;慢病毒載體的構(gòu)建、改造及其包裝細胞系的建立[A];第九屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2003年

10 劉峰;肖興鵬;田玉科;;大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的構(gòu)建與鑒定[A];2011年全國醫(yī)藥學(xué)術(shù)論壇交流會暨臨床藥學(xué)與藥學(xué)服務(wù)研究進展培訓(xùn)班論文集[C];2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 原莉莉;慢病毒載體介導(dǎo)的HSP47 siRNA抑制PVR的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張志強;輻射誘導(dǎo)型SOD2過表達慢病毒載體的構(gòu)建及其在結(jié)腸癌放療中的輻射防護和放療增敏效應(yīng)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

3 楊玉芳;用LMP1構(gòu)建重組慢病毒載體及建立轉(zhuǎn)基因小鼠模型[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

4 徐世永;慢病毒載體法高效轉(zhuǎn)基因雞制備技術(shù)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

5 王玉梅;人PTEN基因RNAi和RESC慢病毒載體的構(gòu)建及其功能的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2011年

6 吳福國;表達Cdc42-shRNA重組慢病毒載體的構(gòu)建及其對膀胱癌細胞影響的實驗研究[D];蘭州大學(xué);2007年

7 馬強;腫瘤翻譯調(diào)控蛋白（TCTP）對結(jié)腸癌細胞LoVo的生物學(xué)特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

8 郝又國;攜帶Rab9 cDNA的慢病毒對C型Niemann-Pick病小鼠的神經(jīng)保護作用[D];華中科技大學(xué);2009年

9 楊歡;慢病毒介導(dǎo)中國人產(chǎn)甲酸草酸桿菌中草酸分解基因FRC和OXC轉(zhuǎn)染肝干細胞的實驗研究[D];華中科技大學(xué);2011年

10 張文卿;HCMV pp150表達及E1-pp65慢病毒載體刺激T細胞免疫應(yīng)答的研究[D];山東大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 熊冬蘭;白細胞介素-18基因慢病毒表達載體抗肺癌作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 許媛;TWEAK慢病毒載體的構(gòu)建及在肝癌細胞中的表達與功能初步研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 鄧乃剛;p.93K-T QDPR基因慢病毒過表達載體的構(gòu)建[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 徐小隔;Let-7d慢病毒載體對體外骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞分化的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

5 王碩;慢病毒介導(dǎo)BMPR Ⅱ基因沉默對人肝癌移植瘤生長的影響[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2015年

6 操儲云;4個沉默雞Ii基因慢病毒載體的構(gòu)建及其效果比較[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 楊碧慧;RNA干擾靶向沉默SPAG6基因?qū)θ薓DS細胞體內(nèi)外生長的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

8 王旋;SIRT2調(diào)節(jié)HSP90活性的分子機制[D];河南大學(xué);2015年

9 張U，

本文編號：1757085