GFP綠色熒光法輔助篩選玉米轉(zhuǎn)基因植株
本文選題:玉米 + 轉(zhuǎn)基因植株; 參考:《玉米科學(xué)》2017年02期
【摘要】:利用GFP(Green Fluorescence Protein)綠色熒光蛋白基因作為輔助性篩選標(biāo)記基因,基因槍法轟擊玉米自交系A(chǔ)188和Qi319未成熟胚的胚性愈傷組織。瞬間表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,轟擊后GFP表達(dá)可持續(xù)近20 d,轟擊后10 d左右表達(dá)量仍保持在較高的水平。采用潮霉素篩選、GFP熒光法鑒定,獲得一批玉米轉(zhuǎn)基因植株,轉(zhuǎn)化頻率為0.33%~0.47%。分子鑒定和后代分析的結(jié)果表明,外源基因已經(jīng)整合到了玉米基因組中,并能夠穩(wěn)定地表達(dá)和遺傳。GFP作為輔助性篩選標(biāo)記基因可以直觀、快速和有效地消除玉米遺傳轉(zhuǎn)化工作中的假陽(yáng)性現(xiàn)象。
[Abstract]:The green fluorescent protein (GFP) gene of GFP(Green Fluorescence was used as auxiliary screening marker gene to bombardment embryogenic callus of immature embryos of maize inbred lines A188 and Qi319.The results of transient expression experiment showed that the expression of GFP was sustained for nearly 20 days after bombardment and remained at a high level about 10 days after bombardment.A batch of transgenic maize plants were identified by hygromycin screening and GFP fluorescence method. The transformation frequency was 0.33 and 0.47.The results of molecular identification and progeny analysis showed that exogenous genes had been integrated into the maize genome and could be stably expressed and inherited as auxiliary screening marker genes.The false positive phenomenon in maize genetic transformation is eliminated quickly and effectively.
【作者單位】: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/作物生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金(31070253) 轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專(zhuān)項(xiàng)(2011ZX08009-002)
【分類(lèi)號(hào)】:S513
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,本文編號(hào):1752009
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