靶向抑制Id1基因調(diào)控Wnt信號通路促進骨肉瘤MG63細胞凋亡
發(fā)布時間:2018-04-13 13:40
本文選題:骨肉瘤 + 分化抑制蛋白質(zhì)類 ; 參考:《腫瘤》2017年09期
【摘要】:目的:研究分化抑制因子1(inhibitor of differentiation 1,Id1)基因?qū)θ斯侨饬黾毎鸐G63凋亡的影響,并探討可能的作用機制。方法 :通過重組腺病毒感染的方法將特異性針對Id1基因的Id1-si RNA轉(zhuǎn)入骨肉瘤細胞MG63中,分別采用半定量RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測Id1 m RNA和蛋白的表達水平;AnnexinⅤ-FITC單染法及DAPI染色法檢測對細胞凋亡的影響,FCM法檢測對細胞周期分布的影響。蛋白質(zhì)印跡法檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和survivin,以及Wnt信號通路關(guān)鍵蛋白β-鏈蛋白(β-catenin)、受體酪氨酸激酶樣孤兒受體(2receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 2,ROR2)和CCAAT/增強子結(jié)合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)蛋白的表達水平。結(jié)果:采用重組腺病毒Ad-Id1-siR NA感染MG63細胞后,Id1 mR NA及蛋白的表達水平均明顯下調(diào)(P值均0.05);AnnexinⅤ-FITC單染法和DAPI染色檢測結(jié)果顯示,沉默Id1基因表達后MG63細胞的凋亡率明顯提高(P值均0.05);半定量RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測結(jié)果顯示,抗凋亡因子Bcl-2和survivin mR NA及蛋白的表達水平均明顯下調(diào)(P值均0.05);蛋白質(zhì)印跡法檢測結(jié)果顯示,Wnt信號通路關(guān)鍵蛋白β-catenin以及Wnt通路相關(guān)蛋白ROR2和CHOP的表達水平均明顯下調(diào)(P值均0.05)。結(jié)論 :靶向沉默Id1基因表達能促進骨肉瘤細胞的凋亡,其作用可能與抑制Wnt信號通路的活性有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to study the effect of 1(inhibitor of differentiation 1 / Id1 gene on apoptosis of human osteosarcoma cell line MG63, and to explore the possible mechanism.Methods: Id1-si RNA specific for Id1 gene was transfected into osteosarcoma cell line MG63 by recombinant adenovirus infection.The expression level of Id1 m RNA and protein was detected by semi-quantitative RT-PCR and Western blotting respectively. Annexin 鈪,
本文編號:1744779
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