本文選題：卵巢癌 + 乳腺癌�。� 參考：《揚州大學》2016年博士論文

【摘要】：隨著分子生物學、細胞生物學和生命分析化學的發(fā)展, “后基因組時代”功能基因組學的研究不斷深入,越來越多的促進腫瘤發(fā)生發(fā)展的基因被人類所認識。本論文圍繞腫瘤基因功能的甄定、基因表達水平的檢測、基因促進腫瘤細胞生長的規(guī)律等方面開展研究。1.人卵巢癌組織中UHRF1基因檢測與分析化學合成針對UHRF1基因的siRNA或shRNA干擾片段,將其轉(zhuǎn)入卵巢癌細胞株SKOV-3、OVCAR-3、HO-8910和HO-8910 PM,抑制其在細胞株中的表達,探索UHRF1基因在卵巢癌細胞中的生物學功能。采用實時定量聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和Western blot驗證RNAi的沉默效果；CCK-8試驗檢測UHRF1基因沉默前后細胞增殖水平的變化。流式細胞術和Hoechst33342檢測細胞的凋亡水平。Transwell小室試驗檢測細胞的侵襲能力。用Western blot技術檢測HO-8910和HO-8910 PM細胞周期蛋白Cyclin D2, Cyclin E, Cyclin B1的表達。用流式細胞術檢測HO-8910和HO-8910 PM細胞株UHRF1基因沉默前后細胞周期分布的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),抑制UHRF1基因在卵巢癌細胞中的表達,細胞的生長能力和侵襲能力減弱,細胞凋亡增加；UHRF1敲減后,HO-8910細胞發(fā)生了G2/M期阻滯,Cyclin B1蛋白的表達增加。該研究表明UHRF1基因是促進腫瘤細胞生長的功能癌基因。2.卵巢癌細胞株UHRF1基因功能分析方法的應用研究應用RT-PCR和Western-blot技術,研究UHRF1在卵巢癌組織中的表達。采用免疫組織化學方法,檢測上皮性卵巢癌良性腫瘤組織和上皮性卵巢癌組織中UHRF1陽性表達并分析其與患者的年齡、卵巢癌臨床分期、細胞分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關系,為卵巢癌的診療和評估預后提供理論依據(jù)。RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示,UHRF1 mRNA和蛋白在卵巢癌組織中的表達高于對應的癌旁組織(P0.01；P0.05)；免疫組織化學結(jié)果顯示,卵巢癌良性腫瘤組織中UHRF1表達陽性率為6.67%(1/15),卵巢癌組織中陽性率為42.86%(24/56)。卵巢癌組織中UHRF1陽性率高于卵巢良性腫瘤組織,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；分析56例石蠟包埋卵巢癌組織塊的臨床病理資料發(fā)現(xiàn),UHRF1的表達與卵巢癌的分級有關(P0.05),而與患者的年齡、腫塊的大小以及腫瘤的分期和淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移無關(P0.05)。結(jié)果提示UHRF1基因有望發(fā)展成為新的腫瘤標志物。3.乳腺癌細胞株周期蛋白Cyclin Y檢測分析細胞周期蛋白Cyclin Y(CCNY)能夠與腫瘤相關基因PFTK1相互作用,調(diào)節(jié)腫瘤細胞的生長。本論文分析了65例乳腺癌組織和4株乳腺癌細胞系BT-474, MDA-MB-231, T-47D and MCF-7由CCNY的表達水平。應用慢病毒介導的ShRNA抑制細胞周期蛋白Y在兩種乳腺癌細胞mda-mb-231和MCF-7中的表達。MTT比色法、克隆形成試驗和流式細胞技術檢測細胞生長情況。CCNY敲除導致細胞增殖和克隆形成能力顯著減少,運用流式細胞術進行分析,在mda-mb-231細胞中,敲除細胞周期蛋白Cyclin Y導致細胞周期阻滯在G0/Gl期,表明Cyclin Y可以直接參與G1/S期的調(diào)控。進一步探索細胞周期蛋白Cyclin Y在調(diào)控乳腺癌細胞生長過程中潛在的分子機制。對細胞周期蛋白Cyclin Y的敲除,增強了一些蛋白的磷酸化如Bad, p53, GSK3β以及PARP和caspase-3的剪切體。促凋亡蛋白質(zhì)Bad的磷酸化能夠抑制細胞增殖以及促進細胞凋亡,然而如果Bad蛋白受到抑制則能夠增加細胞的生長速率。多功能激酶GSK-3β在絲氨酸Ser9(22、23)的磷酸化卻抑制了其活性。GSK-3β蛋白的抑制作用反而促進了結(jié)腸癌細胞的凋亡。caspase-3和PARP剪切體含量的增加是指示細胞凋亡的可靠指標。這些表明,細胞周期蛋白Cyclin Y的敲除可能通過激活某些蛋白來誘導細胞凋亡,比如活性蛋白Bad, GSK-3β,PARP,p53依賴的caspase 3,因此,通過RNAi敲除Cyclin Y的表達可能是乳腺癌的分子靶向治療的一個理想選擇。
[Abstract]:With the development of molecular biology , cell biology and life analytical chemistry , the research on functional genomics of " post - genome era " has been deepened , and more and more genes that promote the development of tumor cells have been studied .
The expression of Cyclin D2 , Cyclin E , Cyclin B1 in HO - 8910 and HO - 8910 PM cell line UHRF1 was detected by flow cytometry . The results showed that the expression of HO - 8910 and HO - 8910 PM cell line UHRF1 gene was detected by flow cytometry .
The expression of UHRF1 in ovarian carcinoma was studied by RT - PCR and Western - blot . The expression of UHRF1 mRNA and protein in ovarian cancer tissues was analyzed by RT - PCR and Western - blot .
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本文編號：1744773