本文選題：基因沉默 + 遺傳轉(zhuǎn)化�。� 參考：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報》2017年06期

【摘要】：RNA干擾(RNA interference,RNAi)技術(shù)是研究基因功能的一種常用方法。為解決目前植物RNAi載體構(gòu)建繁瑣復(fù)雜的問題,本研究以常用的植物過量表達(dá)載體pRI 101-AN為基礎(chǔ),在其多克隆位點處插入源自pKANNIBAL載體的內(nèi)含子序列,獲得pRNAi-E載體。在此基礎(chǔ)上,只要將目的基因特異序列的正反向片段分別連接到內(nèi)含子兩側(cè),即可構(gòu)建目的基因的RNAi載體。為了驗證pRNAi-E載體的效果,蘋果IAA29(Md IAA29)基因的正向和反向片段被插入到pRNAi-E載體上,獲得了Md IAA29基因的RNAi載體pRNAi-IAA29。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化,獲得了GL-3蘋果的轉(zhuǎn)基因株系。qRT-PCR數(shù)據(jù)顯示轉(zhuǎn)基因蘋果植株中IAA29的轉(zhuǎn)錄水平比非轉(zhuǎn)基因?qū)φ诊@著下調(diào),表明基于pRNAi-E構(gòu)建的RNAi載體能夠有效地沉默蘋果內(nèi)源基因的表達(dá)。本研究構(gòu)建的pRNAi-E載體使得植物基因RNAi載體構(gòu)建變得簡單高效,對于開展植物基因功能驗證研究具有一定意義。
[Abstract]:RNAi technique is a common method to study gene function.In order to solve the complex problem of plant RNAi vector construction at present, the pRNAi-E vector was obtained by inserting intron sequence from pKANNIBAL vector on the basis of plant overexpression vector pRI 101-AN.On this basis, the RNAi vector of the target gene can be constructed as long as the positive and negative fragments of the specific sequence of the target gene are respectively connected to the two sides of the intron.In order to verify the effect of pRNAi-E vector, the forward and reverse fragments of IAA29(Md IAA29 gene were inserted into pRNAi-E vector, and the RNAi vector pRNAi-IAA29 of Md IAA29 gene was obtained.The results of Agrobacterium tumefaciens mediated genetic transformation showed that the transcriptional level of IAA29 in transgenic apple was significantly lower than that in non-transgenic control.The results showed that the RNAi vector constructed based on pRNAi-E could effectively silence the expression of endogenous gene in apple.The pRNAi-E vector constructed in this study makes the construction of plant gene RNAi vector simple and efficient, and has certain significance for the research of plant gene function verification.
【作者單位】： 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31470678)
【分類號】：Q943.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高瑞;使基因沉默[J];飛碟探索;2001年06期

2 肖友國;基因沉默[J];生物學(xué)教學(xué);2002年12期

3 孟祥兵,賈壽華,王秀芳;基因沉默與生長發(fā)育[J];生命的化學(xué);2002年02期

4 魏決;引起生物轉(zhuǎn)基因沉默的因素、作用和對策[J];四川食品與發(fā)酵;2002年02期

5 房師松,鄧平建,趙樹進(jìn);基因沉默機(jī)制與預(yù)防對策[J];衛(wèi)生研究;2004年04期

6 封福廣;基因沉默及其生理學(xué)意義[J];衡水師專學(xué)報(綜合版);2004年02期

7 彭燕;基因沉默發(fā)生和應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2004年04期

8 陳雪梅,杜顯剛,譚志巍,王亞琴,官鵬;基因沉默的研究進(jìn)展[J];法律與醫(yī)學(xué)雜志;2005年03期

9 韓婧;;基因沉默及克服策略[J];滄州師范�？茖W(xué)校學(xué)報;2006年04期

10 祝鐵鋼;武大勇;;基因沉默的生理意義及其應(yīng)用[J];畜牧與飼料科學(xué);2011年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 施定基;張文俊;鄧元告;冉亮;康瑞娟;趙興貴;張越南;;藻類基因工程的一些進(jìn)展[A];中國海洋生化學(xué)術(shù)會議論文薈萃集[C];2005年

2 陳愛葵;李梅紅;;RNAi—基因沉默[A];遺傳學(xué)進(jìn)步與人口健康高峰論壇論文集[C];2007年

3 焦鋒;樓程富;;基因在植物多倍體中的進(jìn)化研究進(jìn)展[A];中國蠶學(xué)會第三屆青年學(xué)術(shù)研討會暨浙江省第二屆青年學(xué)術(shù)論壇——蠶桑分論壇論文集（上冊）[C];2001年

4 戴禎;武蓉;高飛;姚潮剛;韓楊;唐成程;趙致陽;逄大欣;;RNAi的毒性研究進(jìn)展[A];全國動物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2012年

5 楊晶;徐欣欣;王灝婷;劉鋼;;頂頭孢霉qde2基因的功能研究[A];2012年第五屆全國微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2012年

6 李云;相建海;Cunming Duan;;靶向基因沉默揭示了斑馬魚IGFBP-3在胚胎發(fā)育中的功能[A];中國海洋湖沼動物學(xué)會魚類學(xué)分會第七屆會員代表大會暨朱元鼎教授誕辰110周年慶學(xué)術(shù)研討會學(xué)術(shù)論文摘要集[C];2006年

7 張宏斌;鄭文嶺;馬文麗;;RNAi技術(shù)的應(yīng)用[A];第十屆全軍檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

8 魏紅山;董慶鳴;劉順愛;劉志英;郭晶晶;張四平;成軍;;siRNA誘導(dǎo)HBV基因沉默空間結(jié)構(gòu)與效應(yīng)的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

9 陳偉;徐開林;潘秀英;;RNAi對小鼠T淋巴細(xì)胞BTLA基因沉默實驗研究[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

10 馬會平;劉劍利;孫紹華;郭興;姜亮;李福才;;STK15基因沉默對其表達(dá)和細(xì)胞增殖的影響[A];北方遺傳資源的保護(hù)與利用研討會論文匯編[C];2010年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 南方日報記者 張勝波　林亞茗 通訊員 粵科宣;“廣東是成果產(chǎn)業(yè)化好地方”[N];南方日報;2011年

2 記者 李荔;朱冰：環(huán)境也可以改變基因[N];北京科技報;2012年

3 張?zhí)锟?垃圾DNA并非垃圾[N];文匯報;2012年

4 穆婉婷;土耳其新植物基因庫建成并使用[N];中國食品質(zhì)量報;2010年

5 記者 何永晉;烏決定建立世界第二大植物基因庫[N];科技日報;2001年

6 實習(xí)生 徐冰;植物怎么“看”世界？[N];科技日報;2012年

7 周和毅;國家植物基因研究中心在武漢建立[N];中國特產(chǎn)報;2001年

8 本報記者 李鵬;李傳友：當(dāng)植物面臨逆境[N];北京科技報;2010年

9 孟慶鵬 郭堅華;世界轉(zhuǎn)基因植物研究的進(jìn)展[N];農(nóng)民日報;2001年

10 據(jù)中國科技信息研究所資料;給植物基因編碼[N];湖北科技報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張興坦;煙草MAPK基因的功能研究[D];重慶大學(xué);2015年

2 穆春;棉花耐鹽基因篩選及酪氨酸蛋白磷酸酶基因功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 高慧慧;潛伏相關(guān)基因UL138在人巨細(xì)胞病毒潛伏—激活中的調(diào)控及機(jī)制[D];浙江大學(xué);2015年

4 張凌娣;同源序列高劑量異常表達(dá)及病毒編碼蛋白對基因沉默的作用[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

5 袁佐清;東亞三角渦蟲DjPreb和DjStag基因表達(dá)與功能分析[D];中國海洋大學(xué);2010年

6 邱慶明;若干生精細(xì)胞相關(guān)基因功能初步研究[D];中南大學(xué);2009年

7 陳婷;果蠅中染色體乙�；c去乙�；揎椉捌渑c熱休克基因表達(dá)的關(guān)系[D];東北師范大學(xué);2002年

8 申彥森;基于內(nèi)含子剪切的人工miRNA結(jié)構(gòu)和靶向位點與基因沉默效率的關(guān)系研究[D];武漢大學(xué);2009年

9 姜國勇;番茄Tm-2～2基因在煙草中的表達(dá)及其編碼蛋白特異氨基酸決定對病毒的抗性[D];福建農(nóng)林大學(xué);2003年

10 麻鵬達(dá);基因沉默抑制子P1/HC-Pro和P25在瞬時體系中的作用[D];東北師范大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 向婷;滲透壓脅迫下AM真菌Rhizophagus irregularis HOG1基因的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 宋雪;利用CRISPR/Cas9和TALENs技術(shù)敲除斑馬魚Vap、C1H7orf55、mri1、BX284640.3和dscr6基因[D];山東大學(xué);2015年

3 任易婕;小麥耐逆基因TaNAC3和TaSIRT6功能研究[D];山東大學(xué);2015年

4 王夢瑤;運用CRISPR-Cas9系統(tǒng)對大麥維生素E合成相關(guān)基因進(jìn)行編輯的研究[D];浙江大學(xué);2015年

5 常t，

本文編號：1743435