本文選題：沼澤紅假單胞菌 + 降解酶蛋白�。� 參考：《湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：甲氰菊酯(Fenpropathrin)是一種人工合成的高效廣譜擬除蟲菊酯類仿生農(nóng)藥。具有藥效快,擊倒性強和藥效持久的特點,同時在自然環(huán)境中不容易分解。隨著甲氰菊酯在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的大量應(yīng)用,甲氰菊酯的農(nóng)藥殘留問題,越來越受到大家的關(guān)注。本研究利用前期分離到的降解甲氰菊酯菌株沼澤紅假單胞菌PSB-S,對其降解基因進(jìn)行克隆,成功克隆到三個降解基因Est3384, Est3385和Est3706,氨基酸序列系統(tǒng)發(fā)育樹分析,三個降解酶基因分別屬于酯酶超家族中的家族Ⅰ、Ⅷ和ⅡI。將這三個基因構(gòu)建于pGEX-3x原核表達(dá)載體,獲得了pGEX-3X-3384、pGEX-3X-3385、 pGEX-3X-3706三個重組質(zhì)粒,導(dǎo)入E.coli Rosetta,進(jìn)行降解酶蛋白的原核表達(dá)。三個降解酶蛋白的最優(yōu)表達(dá)條件為35℃,IPTG濃度0.7mmol/1。誘導(dǎo)表達(dá)獲得了三個55kDa的可溶性蛋白(目的蛋白加上GST標(biāo)簽)。蛋白純化和Western blot驗證結(jié)果表明,三個降解酶蛋白均為目的蛋白。三個降解酶蛋白的降解動力學(xué)和降解特性分析表明,三個降解酶蛋白最佳降解甲氰菊酯的條件為35℃,pH 7.0。三個降解酶蛋白均能降解7種不同的菊酯類農(nóng)藥,Est3385的最佳底物為甲氰菊酯,Est3384和Est3706的最佳底物為甲氰菊酯和氯氰菊酯,三個降解酶蛋白的降解效率均受到金屬離子的抑制。本研究的原核表達(dá)的降解酶蛋白,為甲氰菊酯農(nóng)藥殘留物的生物修復(fù)提供了新的資源,同時為構(gòu)建高效降解甲氰菊酯工程菌提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:Fenpropathrinis is a synthetic broad spectrum pyrethroid bionic pesticide.It has the characteristics of fast drug effect, strong knock down and lasting effect, and it is not easy to decompose in the natural environment at the same time.With the extensive application of fenpropathrin in agricultural production, more and more attention has been paid to the pesticide residues of fenpropathrin.In this study, three degradation genes, Est3384, Est3385 and Est3706, were cloned from PSB-Sof Rhodopa marsh, which were isolated in the early stage, and the amino acid sequence phylogenetic tree was analyzed.The three degrading enzyme genes belong to the esterase superfamily 鈪，

本文編號：1738958