本文選題：地黃　切入點：環(huán)烯醚萜苷　出處：《河南師范大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：地黃(Rehmannia glutinosa)隸屬玄參科地黃屬,是一種多年生草本植物,是著名的“四大懷藥”之一。萜類化合物是地黃中一種重要的次生代謝產(chǎn)物,而環(huán)烯醚萜苷是重要的單萜類化合物,是地黃藥用的主要成分之一。DXR、GPPS、G10H、10HGO是環(huán)烯醚萜苷類化合物合成上游途徑的四個關(guān)鍵酶,本研究以地黃85-5和金九為實驗材料,研究地黃總環(huán)烯醚萜苷的積累及相關(guān)酶基因的表達,分析了品種、產(chǎn)地、甲基化抑制劑對地黃環(huán)烯醚萜苷合成的影響,并克隆了DXR基因及其啟動子,為進一步驗證DXR基因的功能奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1、地黃總環(huán)烯醚萜苷的含量隨著地黃的生長發(fā)育呈先升高后下降的趨勢,在地黃處于成熟期時,其含量最高。在地黃生長前期,葉中總環(huán)烯醚萜苷含量高于根中,而經(jīng)成熟期后低于根中。地黃不同品種中總環(huán)烯醚萜苷含量存在差異,在地黃生長前期,金九葉中總環(huán)烯醚萜苷含量高于地黃85-5中,而根中總環(huán)烯醚萜苷含量卻低于地黃85-5。另外,在地黃生長的后期,金九根中總環(huán)烯醚萜苷含量高于85-5中,而葉中總環(huán)烯醚萜苷含量卻略低于地黃85-5。2、地黃環(huán)烯醚萜苷類化合物合成相關(guān)酶基因DXR、GPPS、G10H、10HGO的表達具有時空及品種差異性。DXR基因在地黃葉中的表達高于根和莖中,且葉中DXR基因表達的高峰期多出現(xiàn)地黃生長的Ⅲ-Ⅳ期,但因品種不同而略有差異。GPPS基因在85-5不同組織中表達的變化趨勢較為一致,在第Ⅲ期時表達量達到最大;地黃金九葉中GPPS基因的表達隨著地黃生長不斷升高,在第Ⅴ期時最高。G10H基因在地黃葉中的表達要高于根和莖中,且在第Ⅳ期表達量最大,而地黃根和莖中G10H基因的表達情況因品種差異而不同。10HGO為多功能酶,其編碼基因的表達較復(fù)雜。3、產(chǎn)地對地黃環(huán)烯醚萜苷的積累及相關(guān)酶基因的表達有很大的影響,其中溫縣產(chǎn)區(qū)地黃總環(huán)烯醚萜苷的含量高于新鄉(xiāng)產(chǎn)區(qū)。環(huán)烯醚萜苷合成相關(guān)基因在不同產(chǎn)區(qū)地黃的表達不同,在地黃生長的前期,溫縣產(chǎn)區(qū)DXR2基因在不同組織中的表達量均明顯高于新鄉(xiāng)產(chǎn)區(qū),DXR4基因的表達情況與DXR2基因相似。在地黃的整個生長過程中,溫縣產(chǎn)區(qū)地黃根中GPPS的表達量均高于新鄉(xiāng)產(chǎn)區(qū),而溫縣產(chǎn)區(qū)莖和葉中GPPS的表達量僅在地黃生長前期高于新鄉(xiāng)產(chǎn)區(qū)。同樣,在地黃生長的前期,溫縣產(chǎn)區(qū)G10H基因在不同組織中的表達量均明顯高于新鄉(xiāng)產(chǎn)區(qū)。溫縣產(chǎn)區(qū)地黃根和莖中10HGO6的表達量明顯低于新鄉(xiāng)產(chǎn)區(qū),而10HGO33的表達量卻高于新鄉(xiāng)產(chǎn)區(qū)。4、5-azaC對地黃環(huán)烯醚萜苷類化合物的積累及相關(guān)酶基因表達有顯著的作用。5-azaC促進了地黃總環(huán)烯醚萜苷的積累,且隨著5-azaC濃度的升高促進作用先增強后降低,其中50μM5-azaC對總環(huán)烯醚萜苷的積累作用最大。5-azaC對環(huán)烯醚萜苷合成相關(guān)酶基因的表達影響十分復(fù)雜,大多為促進基因的表達,但也存在抑制作用;其中30μM-50μM的5-azaC對于基因的表達影響最為廣泛。5、本研究克隆了DXR基因c DNA全長序列,包含205bp的5’-UTR、1425bp的CDS和356bp的3’-UTR,共編碼474個氨基酸。采用改良的hiTAIL-PCR法克隆獲得了DXR基因啟動子部分片段,預(yù)測了該啟動子包含CAAT box、CAT box、胚乳表達所需調(diào)控順式調(diào)控元件和TATA box。另外,構(gòu)建了DXR基因植物表達載體,為進一步驗證DXR基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The content of total iridoid glycoside in the leaves of Radix Rehmanniae is higher than that of Radix Rehmanniae 85 - 5 . The content of total iridoid glycoside in the leaves of Radix Rehmanniae is higher than that of Radix Rehmanniae 85 - 5 . In the early stage of growth of Rehmanniae , the content of total iridoid glycoside in leaves is higher than that of Radix Rehmanniae 85 - 5 . In the early stage of the growth of Rehmanniae , the content of total iridoid glycoside in leaves is higher than that of Rehmanniae Radix 85 - 5 . In the early stage of growth of Rehmanniae , the content of total iridoid glycoside in leaves is higher than that of Rehmanniae . The results showed that the expression of GPPS was higher than that in Xinxiang , but the expression of GPPS was significantly higher than that in Xinxiang .

【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S567.234

【參考文獻】

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本文編號：1730312