本文選題：粘蟲　切入點(diǎn)：胰蛋白酶　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2017年06期

【摘要】：【目的】通過克隆粘蟲Mythimna separata(Walker)(Lepidoptera:Noctuidae)中腸胰蛋白酶基因5′端側(cè)翼啟動(dòng)子序列,并分析啟動(dòng)子功能,為進(jìn)一步探索昆蟲胰蛋白酶活性調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。【方法】利用Genome Walking方法克隆粘蟲中腸胰蛋白酶基因5′端側(cè)翼啟動(dòng)子序列,運(yùn)用在線分析軟件NNPP v.2.2和數(shù)據(jù)庫JASPAR進(jìn)行序列分析,構(gòu)建由胰蛋白酶基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因載體,通過轉(zhuǎn)染草地貪夜蛾sf21細(xì)胞系,瞬時(shí)表達(dá)后用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)分析該啟動(dòng)子活性�！窘Y(jié)果】克隆得到粘蟲中腸胰蛋白酶基因5′端側(cè)翼啟動(dòng)子序列1 863bp,其中含TATA框、CAAT框等啟動(dòng)子核心序列及GATA、STAT、C/EBP等轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)分析表明,相對于空載體pGL3-Basic,所構(gòu)建的重組載體p(-1 673/+25)具有明顯的啟動(dòng)子活性�！窘Y(jié)論】克隆得到的啟動(dòng)子片段明顯具有啟動(dòng)報(bào)告基因表達(dá)的能力,可用于在胰蛋白酶基因啟動(dòng)子水平和轉(zhuǎn)錄因子水平研究杠柳新苷活性化合物的激活機(jī)理。
[Abstract]:[objective] to clone the 5 'flanking promoter sequence of the midgut trypsin gene of Mythimna separata Walkeria: Noctuidae, and to analyze the promoter function.[methods] Genome Walking method was used to clone the 5 'flanking promoter sequence of intestinal trypsin gene.Using online analysis software NNPP v.2.2 and database JASPAR for sequence analysis, a fluorescent luciferase reporter gene vector driven by trypsin gene promoter was constructed and transfected into sf21 cell line.After transient expression, the promoter activity was analyzed by double luciferase reporter gene detection system. [results] the 5'flanking promoter sequence of 5 'trypsin gene from Myxomycetes was cloned into 1863 BP, which contained TATA frame, CAAT frame and other promoter nuclei.Cardiac sequence and transcriptional regulatory elements, such as GATAA STATX C / EBP.The analysis of double luciferase reporter gene system showed that the recombinant vector pGL-673 / 25 had obvious promoter activity compared with the empty vector pGL3-Basic.Conclusion the cloned promoter fragment has the ability to initiate reporter gene expression.It can be used to study the activation mechanism of the active compounds at the level of trypsin gene promoter and transcription factor.
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院;西北農(nóng)林科技大學(xué)林學(xué)院;
【基金】：國家重大基礎(chǔ)研究規(guī)劃(“973”計(jì)劃)項(xiàng)目(2010CB126100) 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31071704,31300548) 陜西省農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(2014k02-10-02)
【分類號】：Q966

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本文編號：1711417