發(fā)布時(shí)間：2018-04-04 03:13

  本文選題：膀胱癌　切入點(diǎn)：前列腺干細(xì)胞抗原　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤,統(tǒng)計(jì)顯示,膀胱癌發(fā)病率達(dá)3.0~12/10萬人次,全球每年膀胱癌約新增386300例,死亡150200例,我國(guó)每年膀胱癌約新增55486例,死亡26820例。膀胱癌的病因和發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,目前尚未完全闡明,也無特異的治療方法,患者生存質(zhì)量差、復(fù)發(fā)率高、病死率高,給人類生命安全帶來巨大威脅。膀胱癌發(fā)生發(fā)展是多因素、多階段的過程,流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)了膀胱癌的許多危險(xiǎn)因素,如吸煙、職業(yè)暴露、飲酒、感染等,但僅有少部分暴露于這些危險(xiǎn)因素的人患病及父母患膀胱癌,其子女罹患膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)將大大增高的事實(shí)以及表明遺傳易感性在膀胱癌發(fā)病中起至關(guān)重要的作用。膀胱癌的發(fā)病呈一定的家庭聚集性也提示遺傳因素可能參與膀胱癌的發(fā)病過程。前列腺干細(xì)胞抗原(Prostate Stem Cell Antigen,PSCA)屬于Thy-1/Ly-6家族的葡萄糖酯酰肌醇錨定的細(xì)胞表面抗原成員之一,其參與細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞間的粘附,在干細(xì)胞、祖細(xì)胞自我更新(抗凋亡)或增殖等功能方面起重要作用。多項(xiàng)研究表明,正常膀胱組織中并無PSCA蛋白表達(dá),而癌組織中PSCA的表達(dá)量會(huì)隨著病理分級(jí)和分期的增加相對(duì)逐漸增高,且PSCA蛋白高表達(dá)與非肌層浸潤(rùn)性膀胱尿路上皮癌的復(fù)發(fā)明顯相關(guān)。全基因組關(guān)聯(lián)研究,發(fā)現(xiàn)了16個(gè)與膀胱癌遺傳易感相關(guān)的基因,包括CBX6-APOBEC3A基因rs1014971、NAT2-PSD3基因rs1495741、RNA5SP357-RNA5SP358基因rs2204008等。rs2294008位于PSCA基因第一個(gè)外顯子內(nèi),該位點(diǎn)由“C”改變?yōu)椤癟”,作為一個(gè)錯(cuò)義突變,其可以改變PSCA基因的起始密碼子,基因錯(cuò)義突變會(huì)影響到蛋白質(zhì)的折疊、細(xì)胞內(nèi)修飾或轉(zhuǎn)運(yùn),誘發(fā)癌癥。近年來,已有研究發(fā)現(xiàn)PSCA rs2294008基因多態(tài)性與癌癥發(fā)生存在相關(guān)性,rs2294008風(fēng)險(xiǎn)等位基因T與膀胱癌組織中PSCA m RNA表達(dá)水平有相關(guān)性。以上數(shù)據(jù)顯示,PSCA上的rs2294008的遺傳突變?cè)诎螂装┑陌l(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著重要作用。本課題擬采用病例對(duì)照研究設(shè)計(jì),通過以全基因組關(guān)聯(lián)研究方法為線索,應(yīng)用PCR技術(shù)對(duì)膀胱癌和正常對(duì)照人群進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性rs2294008檢測(cè),探討其與膀胱癌遺傳易感性的關(guān)系。本課題的完成將有助于闡明PSCA基因rs2294008遺傳突變?cè)诎螂装┌l(fā)病中的作用,進(jìn)一步揭示膀胱癌的發(fā)病機(jī)制,并為尋找膀胱癌新的診斷及治療靶點(diǎn)提供科學(xué)依據(jù)。目的比較膀胱癌患者和正常對(duì)照PSCA基因rs2294008位點(diǎn)等位基因和基因型頻率分布的差異,探討PSCA基因rs2294008多態(tài)性與膀胱癌易感性、膀胱癌病理分期分級(jí)以及預(yù)后的相關(guān)性,以期為中國(guó)人群膀胱癌遺傳關(guān)聯(lián)研究及遺傳易感位點(diǎn)研究提供本底數(shù)據(jù)。方法采用病例-對(duì)照研究的方法,收集2014年6月~2016年08月安徽醫(yī)科大學(xué)深圳二院臨床學(xué)院病理確診或在其他大型醫(yī)院確診而來我院定期復(fù)診的膀胱尿路上皮癌81例中國(guó)漢族人群(病例組),及相同地區(qū)同期且性別、年齡與病例組相匹配的健康對(duì)照者95例(對(duì)照組)的血液標(biāo)本。提取病例組和對(duì)照組的血液基因DNA后,采用聚合酶鏈反應(yīng)、凝膠電泳及測(cè)序方法進(jìn)行基因型分型。采用t檢驗(yàn)(連續(xù)變量)和χ2檢驗(yàn)(分類變量)比較兩組基礎(chǔ)資料、等位基因頻率以及基因型頻率分布。采用擬合優(yōu)度χ2檢驗(yàn)分析PSCA基因rs2294008位點(diǎn)基因型分布在病例組和對(duì)照組是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。采用非條件多因素Logistic回歸模型分析PSCA rs2294008基因型頻率與膀胱癌的相關(guān)性及主要暴露因素對(duì)基因遺傳變異效應(yīng)的混雜作用,并分析PSCA基因rs2294008單核苷酸多態(tài)性與膀胱癌病理分期、分級(jí)以及預(yù)后的關(guān)聯(lián)性。比值比(odds ratios,OR)及95%置信區(qū)間(confidence intervals,CI)表示各基因型與膀胱尿路上皮癌的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0軟件進(jìn)行,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果(1)病例組和對(duì)照組臨床基本資料特點(diǎn)病例組與正常對(duì)照組在性別構(gòu)成比、年齡、家庭收入、文化程度、吸煙、飲酒等臨床資料比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),具有可比性。病例組與正常對(duì)照組PSCA基因多態(tài)性rs2294008位點(diǎn)基因型頻率均達(dá)到了Hardy-Weinberg遺傳平衡(P0.05)。(2)rs2294008基因及基因型頻率在病例組與對(duì)照組的分布PSCA基因rs2294008位點(diǎn)CC、CT、TT三種基因型在病例組所占的比例分別為32.10%(26/81)、46.91%(38/81)、20.99%(17/81),在對(duì)照組分別為44.21%(42/95)、43.16%(41/95)、12.63%(12/95),經(jīng)χ2檢驗(yàn),PSCA基因各基因型頻率分布在病例組與正常對(duì)照組之間存在顯著差異(χ2=21.647,P0.05)。PSCA基因rs2294008的突變型等位基因T在病例組中的頻率為67.90%(55/81),在對(duì)照組為55.79%(53/95),兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=27.307,P0.05)。(3)PSCA基因rs2294008單核苷酸多態(tài)性與膀胱癌易感性的關(guān)聯(lián)分析通過多因素Logistic回歸模型分析發(fā)現(xiàn)PSCA基因rs2294008位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)漢族人群膀胱癌癌遺傳易感性明顯相關(guān),攜帶突變基因型(CT+TT)個(gè)體發(fā)生膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)性顯著上升(P0.05,OR=1.409,95%CI=1.185-1.679,經(jīng)年齡、性別、吸煙、飲酒史校正后)。(4)PSCA基因rs2294008單核苷酸多態(tài)性與膀胱癌風(fēng)險(xiǎn)因素的關(guān)聯(lián)分析經(jīng)Logistic回歸模型進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),在年齡55歲(OR=1.290,95%CI=1.152-1.445),男性(OR=1.260,95%CI=1.120-1.356)、吸煙(OR=1.509,95%CI=1.293-1.761)、飲酒(OR=1.605,95%CI=1.292-1.994)的中國(guó)漢族人群中,攜帶突變基因型(CT+TT)個(gè)體發(fā)生膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)性顯著上升,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)PSCA基因rs2294008單核苷酸多態(tài)性與膀胱癌病理分期的關(guān)聯(lián)分析PSCA基因rs2294008位點(diǎn)CC、CT、TT三種基因型在非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌所占的比例分別為64.52%(20/31)、19.35%(6/31)、16.13%(5/31),在肌層浸潤(rùn)性膀胱癌分別為10.00%(5/50)、64.00%(32/50)、26.00%(13/50),經(jīng)χ2檢驗(yàn),PSCA基因各基因型頻率分布在非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌和肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患者之間存在顯著差異(χ2=1.445E2,P0.05)。PSCA基因rs2294008的突變型等位基因T在非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌中的頻率為35.48%(11/31),在肌層浸潤(rùn)性膀胱癌為90.00%(45/50),兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.678E2,P0.05)。通過多因素Logistic回歸模型分析發(fā)現(xiàn)PSCA基因rs2294008位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)漢族人群肌層浸潤(rùn)性膀胱癌明顯相關(guān),攜帶突變基因型(CT+TT)個(gè)體發(fā)生肌層浸潤(rùn)性膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)性顯著上升(P0.05,OR=4.386,95%CI=2.310-6.477,經(jīng)年齡、性別、吸煙、飲酒史校正后)。(6)PSCA基因rs2294008單核苷酸多態(tài)性與膀胱癌病理分級(jí)的關(guān)聯(lián)分析PSCA基因rs2294008位點(diǎn)CC、CT、TT三種基因型在低級(jí)別組所占的比例分別為41.86%(18/43)、39.53%(17/43)、18.61%(8/43),在高級(jí)別組分別為21.05%(8/38)、57.90%(22/38)、21.05%(8/38),經(jīng)χ2檢驗(yàn),PSCA基因各基因型頻率分布在低級(jí)別組和高級(jí)別組患者之間存在顯著差異(χ2=10.232,P0.05)。PSCA基因rs2294008的突變型等位基因T在低級(jí)別組中的頻率為58.14%(25/43),在高級(jí)別為78.95%(30/38),兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.370,P0.05)。通過多因素Logistic回歸模型分析發(fā)現(xiàn)PSCA基因rs2294008位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)漢族人群高級(jí)別膀胱癌明顯相關(guān),攜帶突變基因型(CT+TT)個(gè)體發(fā)生高級(jí)別膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)性顯著上升(P0.05,OR=2.053,95%CI=1.496-2.819,經(jīng)年齡、性別、吸煙、飲酒史校正后)。(7)PSCA基因rs2294008單核苷酸多態(tài)性與膀胱癌進(jìn)展的關(guān)聯(lián)性研究PSCA基因rs2294008位點(diǎn)CC、CT、TT三種基因型在未進(jìn)展組所占的比例分別為33.82%(23/68)、51.47%(35/68)、14.71%(10/68),在進(jìn)展組分別為15.38%(2/13)、30.77%(4/13)、53.85%(7/13),經(jīng)χ2檢驗(yàn),PSCA基因各基因型頻率分布在未進(jìn)展組和進(jìn)展組患者之間存在顯著差異(χ2=46.113,P0.05)。PSCA基因rs2294008的突變型等位基因T在未進(jìn)展組中的頻率為66.18%(45/68),在進(jìn)展組為84.62%(11/13),兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.718,P0.05)。通過多因素Logistic回歸模型分析發(fā)現(xiàn)PSCA基因rs2294008位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)漢族人群膀胱癌進(jìn)展明顯相關(guān),攜帶突變基因型(CT+TT)個(gè)體發(fā)生膀胱癌進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)性顯著上升(P0.05,OR=1.942,95%CI=1.139-3.309,經(jīng)年齡、性別、吸煙、飲酒史校正后)。(8)PSCA基因rs2294008單核苷酸多態(tài)性與膀胱癌復(fù)發(fā)的關(guān)聯(lián)性研究PSCA基因rs2294008位點(diǎn)CC、CT、TT三種基因型在未復(fù)發(fā)組所占的比例分別為38.89%(21/54)、44.44%(24/54)、16.67%(9/54),在復(fù)發(fā)組分別為14.81%(4/27)、55.56%(15/27)、29.63%(8/27),經(jīng)χ2檢驗(yàn),PSCA基因各基因型頻率分布在未復(fù)發(fā)組和復(fù)發(fā)組患者之間存在顯著差異(χ2=27.990,P0.05)。PSCA基因rs2294008的突變型等位基因T在未復(fù)發(fā)組中的頻率為61.11%(33/54),在復(fù)發(fā)組為85.19%(23/27),兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=22.725,P0.05)。通過多因素Logistic回歸模型分析發(fā)現(xiàn)PSCA基因rs2294008位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)漢族人群膀胱癌復(fù)發(fā)明顯相關(guān),攜帶突變基因型(CT+TT)個(gè)體發(fā)生膀胱癌復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)性顯著上升(P0.05,OR=2.452,95%CI=1.642-3.662,經(jīng)年齡、性別、吸煙、飲酒史校正后)。結(jié)論(1)PSCA基因rs2294008多態(tài)性與中國(guó)漢族膀胱癌的遺傳易感性明顯相關(guān),其突變等位基因T是膀胱癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)等位基因。(2)PSCA基因的rs2294008多態(tài)性與性別,年齡,吸煙、飲酒等不良生活習(xí)慣在膀胱癌發(fā)生中存在著聯(lián)合作用,年齡55歲、男性、吸煙、飲酒的中國(guó)漢族人群中攜帶危險(xiǎn)基因型更容易罹患膀胱癌。(3)PSCA基因的rs2294008多態(tài)性與膀胱癌的病理分期、分級(jí)以及進(jìn)展、復(fù)發(fā)存在關(guān)聯(lián),突變等位基因T是肌層浸潤(rùn)性膀胱癌、高級(jí)別乳頭狀尿路上皮癌發(fā)生以及膀胱癌患者進(jìn)展、復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)等位基因。(4)本組研究結(jié)果進(jìn)一步揭示了膀胱癌病因及發(fā)病機(jī)制,為其基因治療提供了新的靶點(diǎn),并且運(yùn)用回歸分析遺傳因素和環(huán)境因素在膀胱癌發(fā)生中的交互作用,為探索預(yù)防及治療策略提供科學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.14

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1 φrngreen M.C.,Dun. Mφ，

本文編號(hào)：1708119