本文選題：氨氮　切入點(diǎn)：菲律賓蛤仔　出處：《生態(tài)毒理學(xué)報(bào)》2017年02期

【摘要】：為了準(zhǔn)確和系統(tǒng)地分析NH_3-N對(duì)菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)毒性的分子機(jī)制,并對(duì)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行驗(yàn)證,利用ge Norm和Normfinder這2種軟件,以暴露30 d中不同時(shí)間點(diǎn)的鰓組織c DNA為模板,從18S r RNA(18S)、beta-actin(Actin)、beta-tubulin(Tubu)、elongation factor 1-alpha(EF1α)、cyclophilin A(Cy PA)、Ubiquitin(Ub)等6個(gè)備選管家基因中,篩選可以穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因,作為轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析的內(nèi)參基因。以稀釋50倍的鰓組織c DNA模板作為檢測(cè)模板,ge Norm軟件分析獲得6對(duì)備選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性依次為:EF1αCy PAActinTubuUb18S,較優(yōu)內(nèi)參為EF1α和Cy PA;Norm Finder軟件分析獲得6對(duì)備選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性為:EF1αActinTubuCy PAUb18S,最優(yōu)內(nèi)參基因?yàn)镋F1α。為了驗(yàn)證上述篩選結(jié)果,分別以EF1α和Cy PA作為內(nèi)參基因研究unigene1的表達(dá)趨勢(shì),發(fā)現(xiàn)以EF1α為內(nèi)參基因時(shí),unigene1的q RT-PCR的表達(dá)趨勢(shì)與其轉(zhuǎn)錄組表達(dá)倍數(shù)的變化趨勢(shì)一致。因此確定NH_3-N暴露菲律賓蛤仔后,鰓組織中表達(dá)最為穩(wěn)定的內(nèi)參基因?yàn)镋F1α。
[Abstract]:In order to accurately and systematically analyze the molecular mechanism of NH_3-N toxicity to Ruditapes philippinarum, and verify the transcriptional data of related genes, we used ge Norm and Normfinder software. Using c DNA of Gill tissue at different time points during 30 days of exposure as template, six candidate housekeeping genes, including 18s r RNA-18S DNA, beta-tubulin Tububane, factor 1-alpha(EF1 偽 -cyclophilin A(Cy PAA, Ubiquitin (Ub), were screened for stable expression. As the internal reference gene of transcriptome analysis, using 50 times dilute Gill tissue c DNA template as the detection template, the stability of expression of 6 pairs of alternative internal reference genes was obtained by Norm software. The order of stability was:: EF1 偽 Cy PAActinTubuUb18S. the optimal internal parameters were EF1 偽 and Cy PANORM Finder. The stability of the expression of 6 pairs of alternative internal reference genes was obtained by software analysis. The optimal internal reference gene was EF1 偽, and the optimal internal reference gene was EF1 偽. In order to verify the above screening results, EF1 偽 and Cy PA were used as internal reference genes respectively to study the expression trend of unigene1. It was found that the Q RT-PCR expression trend of EF1 偽 was consistent with that of its transcriptional multiple. Therefore, it was determined that after NH_3-N was exposed to clam larvae, the expression trend of Q RT-PCR was the same as that of EF1 偽. The most stable internal reference group in Gill tissue is EF1 偽.
【作者單位】： 寧波大學(xué)海洋學(xué)院;中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所;煙臺(tái)大學(xué)生命學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(41406132)
【分類(lèi)號(hào)】：X171.5

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本文編號(hào)：1690037