本文選題：萊茵衣藻　切入點：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)　出處：《上海海洋大學(xué)學(xué)報》2017年05期

【摘要】：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC,EC 4.1.1.31)在植物碳代謝中有重要作用,高等植物中PEPC可以調(diào)控蛋白質(zhì)和脂肪酸含量,但是對綠藻PEPC的研究還較少。萊茵衣藻是綠藻中的模式生物,其基因工程中外源基因的轉(zhuǎn)化以葉綠體轉(zhuǎn)化效率最高,為了提高外源蛋白表達和獲得高產(chǎn)油萊茵衣藻,利用葉綠體轉(zhuǎn)化法能進一步提高表達效率。因此,本研究首先克隆了萊茵衣藻"細菌型"PEPCCSⅠ(conserved sequenceⅠ)的639 bp,構(gòu)建了p ASap I-reve-Crpepc2和p ASap I-forw-Crpepc2正反向葉綠體表達載體,并用基因槍法轉(zhuǎn)化萊茵衣藻cc-400獲得了空質(zhì)粒型,正向型和反向型轉(zhuǎn)基因藻株。其次,應(yīng)用RTq PCR方法檢測Crpepc2的相對表達量,結(jié)果表明反向型Crpepc2的表達量減少了89.97%,而正向型增加了201.16%。最后,檢測了總蛋白和脂質(zhì)含量的變化,正向型突變株的總蛋白增加了37.03%;而反向型突變株的脂質(zhì)含量增加了70.32%,且不飽和脂肪酸含量明顯增加。以上結(jié)果證明萊茵衣藻"細菌型"PEPC的葉綠體表達不僅可以進一步提高蛋白質(zhì)與脂肪酸含量,也可為今后外源蛋白的表達和高產(chǎn)油工程藻的應(yīng)用做貢獻。
[Abstract]:Phosphoenolpyruvate carboxylase (Phosphoenolpyruvate carboxylase4.1.1.31) plays an important role in plant carbon metabolism. PEPC can regulate the contents of protein and fatty acids in higher plants, but there are few studies on PEPC of Chlorophyta.Chlamydomonas rhinorrhoeae is a model organism in Chlamydomonas rhinophyllum. The transformation efficiency of exogenous gene is highest in chloroplast in order to improve the expression of exogenous protein and obtain the high yield of Chlamydomonas rhinella.Chloroplast transformation can further improve the expression efficiency.Positive and reverse type transgenic algae strains.Secondly, the relative expression of Crpepc2 was detected by RTq PCR method. The results showed that the expression of reverse Crpepc2 decreased 89.97 and the positive Crpepc2 increased 201.16.These results indicated that the chloroplast expression of "bacterial type" PEPC of Chlamydomonas rhinella could not only further increase the content of protein and fatty acids, but also contribute to the expression of exogenous protein and the application of high yield oil engineering algae in the future.
【作者單位】： 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;中國科學(xué)院植物研究所;中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院植物生理生態(tài)研究所;
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(2009AA064401)
【分類號】：Q943.2

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡鴻鈞;“第九屆國際衣藻細胞及分子生物學(xué)大會”在荷蘭召開[J];武漢植物學(xué)研究;2000年03期

2 周云龍;;介紹衣藻的幾種培養(yǎng)方法[J];生物學(xué)通報;1981年01期

3 石進元,趙緯,唐任寰,張慶熹,劉元方,李蔭蓁;微量元素鎵、鍺、砷、銫、鑭、鈰、銥、錸對衣藻生長的影響[J];北京大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);1987年04期

4 高中明;;介紹一種培養(yǎng)衣藻的新方法[J];生物學(xué)通報;1989年03期

5 單振光;;中國衣藻屬一新記錄[J];云南師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);1991年01期

6 張慧沖;衣藻的早春采集[J];生物學(xué)教學(xué);2000年06期

7 陳珊,徐敏,胡鴻鈞;擬衣藻系統(tǒng)分類新證據(jù)[J];水生生物學(xué)報;2004年01期

8 王潮崗,胡章立;萊茵衣藻細胞核轉(zhuǎn)化系統(tǒng)研究進展[J];仲愷農(nóng)業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報;2005年02期

9 胡章立;王潮崗;吳錦霞;;增強型綠色熒光蛋白在萊茵衣藻中的高效表達[J];深圳特區(qū)科技;2005年00期

10 蔣雯婷;王全喜;吳雙秀;;鹽脅迫狀態(tài)下萊茵衣藻849光合特性的初步研究[J];植物研究;2007年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳閱增;張惟杰;李蔭蓁;;幾種元素對衣藻和酵母生長的影響[A];中國營養(yǎng)學(xué)會首屆微量元素專題討論會論文摘要匯編[C];1985年

2 吾甫爾·米吉提;艾山江;徐琴;艾爾肯·熱合蔓;A．S．Chunaev;;萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)中葉綠素b生成的遺傳研究進展[A];第二屆中國青年學(xué)者微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

3 潘俊敏;;模式生物衣藻細胞微管解聚的分子機制[A];2009中國植物學(xué)會植物細胞生物學(xué)學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2009年

4 左照江;李洪濤;朱曄榮;白艷玲;王勇;;酸脅迫對萊茵衣藻保護酶活性的影響[A];植物分子生物學(xué)與現(xiàn)代農(nóng)業(yè)——全國植物生物學(xué)研討會論文摘要集[C];2010年

5 吳志華;黎雙飛;胡章立;;萊茵衣藻線粒體外源基因表達系統(tǒng)的初步研究[A];廣東省植物學(xué)會第十七期學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

6 陳俊;吳錦霞;胡章立;;表達人組織激肽釋放酶基因萊茵衣藻的構(gòu)建與功能研究[A];廣東省植物學(xué)會第十九期學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

7 劉曉磊;閻光宇;王全喜;吳雙秀;;萊茵衣藻外源基因轉(zhuǎn)化和表達的研究[A];節(jié)能環(huán)保 和諧發(fā)展——2007中國科協(xié)年會論文集（一）[C];2007年

8 蘭利瓊;卿人韋;吳巧玉;周密;劉翔;劉佳;劉萍;耿曉娟;傅華龍;;沙角衣藻的抗菌活性研究[A];中國海洋湖沼學(xué)會藻類學(xué)分會第七屆會員大會暨第十四次學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2007年

9 張玉蘭;;衣藻視紫紅質(zhì)的位置及其在細胞分裂周期中的動態(tài)變化[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第七次會議論文摘要匯編[C];1999年

10 徐田枚;張洪濤;吾甫爾·米吉提;艾爾肯·熱合蔓;A．S．Chunaev;;萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)pds基因突變株的突變性質(zhì)分析[A];第二屆中國青年學(xué)者微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 劉晨臨;日本凋毛藻表達序列標(biāo)記及南極衣藻分子系統(tǒng)學(xué)研究[D];中國海洋大學(xué);2004年

2 陳杏洲;衣藻葉綠體表達系統(tǒng)的改造和應(yīng)用及木聚糖酶工程菌的發(fā)酵研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

3 王亮;CrKin13在衣藻鞭毛組裝與解聚中功能和機制的研究[D];清華大學(xué);2013年

4 許麗麗;萊茵衣藻與根瘤菌共培養(yǎng)提高產(chǎn)氫及其生理生態(tài)學(xué)機理[D];華東師范大學(xué);2014年

5 張麗萍;NO與CO調(diào)節(jié)萊茵衣藻銅鐵脅迫[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 丁q，

本文編號：1686953